REZISTENCE EMBRYÍ NĚKTERÝCH DRUHŮ RYB KE KRYOPROTEKTIVŮM PŘI NÍZKÝCH TEPLOTÁCH

Milan ALDORF

Master's thesis

Resistance of some species of fish embryos to cryoprotectants at low temperatures

Abstract:

Na modelových druzích, tzn. kapru obecném (Cyprinus carpio) a línu obecném (Tinca tinca), byly testovány různé kryoprotektivní média pro zmrazování embryí. Cílem studia bylo získání takového kryoprotektivního media, které bude vhodné pro zmrazovaní embryí do teploty -196 oC. U lína obecného byly odzkoušeny kryoprotektiva 10 % a 20 % methanolu nebo 10 % a 20 % glycerinu po dobu 21 minut u embryí ve čtyřech stádiích a to 11, 17, 23 a 29 hodin po aktivaci gamet. Výsledky ukázaly, že embrya lína jsou nejodolnější jak ke snížení teploty, tak ke kryoprotektivu ve stádiu 29 hodin od aktivace gamet a naopak nejméně odolné ve stadiu 11 hodin od aktivace gamet ve srovnání s kontrolou neošetřených embryí. U embryí kapra obecného ve stáří 2, 6, 22, 24 a 42 hodin po aktivaci gamet při teplotě 18 a 22 oC bylo testováno v koncentrační řadě kryoprotektivum metanol a dva roztoky pod označením VS1 a VS2 po předchozím narušení obalu jiker v roztoku enzymu alkalázy. Výsledky ukázaly na snižování rezistence embryí v závislosti na zvyšování koncentrace kryoprotektiva u metanolu. Líhnivost u roztoků VS1 a VS2 i při nejvyšší koncentraci nepoklesla pod hodnotu 60 %. Dosažené výsledky roztoku VS2 byly následně využity pro zmrazování embryí kapra metodou vitrifikace. První výsledky ukázaly až 4 % přežití embryí po uchovávání při teplotě -196 oC.

Abstract:

Different cryoprotectant media for cryopreservation of embryos has been tested on model species, i.e. common carp (Cyprinus carpio) and common tench (Tinca tinca). The aim of the study was to obtain such cryoprotectants, which will be acceptable for freezing embryos up to the temperature {--}196 oC. Cryoprotectants of 10 % and 20 % methanol or 10 % and 20 % glycerin have been tested on the tench for 21 minutes of incubation on embryos of four stages, meaning at 11, 17, 23 and 29-hrs after activation of gametes. The results showed that the tench embryos were most resistant either to low temperature and or to the application of cryoprotectants in the stage of 29-hrs post gametes activation. On the other hand lower resistances were obtained in the stage of 11-hrs post gamete activation. Embryos of carp 2, 6, 22, 24 and 42-hrs after gametes activation at temperature 18 and 22 oC have been used for testing of concentration series of cryoprotectant methanol and two solutions marked VS1 and VS2 after previous disruption of egg envelope in enzyme alcalaze solution. Results showed linear decreasing resistance of embryos depending on increasing concentration of cryoprotectant methanol. Hatching success even at highest concentration of solution VS1 and VS2 has not declined below 70 %. Achieved results with solution VS2 have been subsequently used for freezing of carp embryos by special methods in cryobiology {--} vitrification. First results showed up to 4 % success of survival after freezing of embryos at {$-$}196 oC.

Keywords

Kapr Cyprinus carpio, Lín Tinca tinca, Kryopretektivum, Líhnivost, Embrya, Vitrifikace

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 30. 4. 2007

Accessible from:: 30. 4. 2007

Identifier: 3228

Thesis defence

• Date of defence: 13. 6. 2007
• Supervisor: prof. Ing. Otomar Linhart, DrSc.

University of South Bohemia in České Budějovice

Faculty of Agriculture

Master programme / field:
Agriculture Engineering / Fishery