Modulace dioxinového, estrogenního a androgenního receptoru nekoplanárními PCB

Bc. Petra Hulinková, Ph.D.

Diplomová práce

Modulations of dioxin,estrogenic and androgenic receptors by nencoplanar PCBs

Anotace:

Polychlorované bifenyly jsou významnými kontaminanty životního prostředí. Diplomová práce je zaměřena na studium efektů nekoplanárních PCB na estrogenní, androgenní a arylhydrokarbonový receptor. Cílem této práce bylo napsat rešerši o známých mechanismech toxicity PCB a genové expresi závislé na AhR (arylhydrokarbonový receptor), ER (estrogenní receptor)a AR (androgenní receptor). V experimentální části byla sledována modulace AhR a proliferace v jaterní epiteliální buněčné linii WB-F344 prostřednictvím kvantitativní RT-PCR a měření počtu buněk. Dále byl zaveden AhR- a ARNT(AhR nukleární translokátor)- deficientní model linie WB-F344 s využitím siRNA proti AhR a ARNT. Účinnost transfekce byla sledována metodou Western blottingu a potvrzena metodou kvantitativní RT-PCR. Modulace ER byla sledována v modelových lidských buněčných liniích prsního karcinomu (MCF-7, T47D.Luc). Metodou ER-CALUX (chemical activated luciferase expression assays) byla měřena hladina reportérového genu pro luciferasu v prsní buněčné linii T47D.Luc stabilně transfekované luciferasovým reportérovým genem. Genová exprese pS2mRNA byla stanovena v prsní karcinoma buněčné linii MCF-7 metodou kvantitativní RT-PCR. Efekty na AR byly měřeny v buněčné linii rakoviny prostaty LNCaP prostřednictvím buněčného cyklu a měření hladiny PSAmRNA (prostatický specificky antigen) metodou kvantitativní RT-PCR.

Abstract:

Polychlorinated biphenyls are class of environmental contaminants. This thesis is focused on study of effects of noncoplanar PCBs on estrogen, androgen and aryl hydrocarbon receptor. The purpose of this thesis was written the recherche of well-known mechanisms of toxicity of PCB and gene expression dependent on AhR (aryl hydrocarbon receptor), ER (estrogen receptor) and AR (androgen receptor). In the experimental part was observed modulation of AhR and proliferation in the rat liver epithelial WB-F344 cell line via real-time RT-PCR and via measurement of the number of cells. Further we established AhR- and ARNT-deficient model of WB-F344 due to siRNA against AhR and ARNT. Effectivity of transfection was observed by Western blotting analysis and results were confirmed by real-time RT-PCR. Modulation of ER was observed in the human breast carninoma cell-lines (MCF-7, T47D.luc). In the ER-CALUX (chemical activated luciferase expression assays) assay we measured the level of reporter gene for luciferrase in the cell line T47D.Luc, stably transfected with a luciferase reporter gene. The gene expression pS2mRNA was established in the cell line MCF-7 in real-time RT-PCR. Effects on AR were measured in the human prostatic LNCaP cell line via cell cycle and via measurement of the level of PSAmRNA (prostatic specific antigene) by method real-time RT-PCR.

Klíčová slova

nekoplanární PCB, AhR, ER, AR, transfekce, siRNA, ER-CALUX, proliferace, buněčný cyklus, kvantitativní RT-PCR noncoplanar PCBs, transfection, proliferation, cell cycle, real-time RT-PCR

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 22. 4. 2009

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 12. 6. 2009
• Vedoucí: RNDr. Miroslav Machala, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie