Techniky kultivace a izolace plísně slunečnicové

Tereza DOUDOVÁ

Bakalářská práce

Techniques of cultivation and isolation of sunflower downy mildew

Anotace:

Tato bakalářská práce se zaměřuje na studium technik používaných při kultivaci a izolaci plísně slunečnicové (Plasmopara halstedii) a na optimalizaci metodiky vytváření monozoosporických izolátů. Literární rešerše obsahuje přehled technik monosporické a monosporangiátní izolace používaných u různých druhů mikroskopických organismů a zabývá se problematikou biologie P. halstedii, jejíž pochopení je pro úspěšnou kultivaci a izolaci tohoto patogenu klíčové. Podle výsledků experimentální části práce byl navržen optimální postup pro tvorbu monozoosporických izolátů P. halstedii kapilární technikou. Zoospory uvolněné z čerstvě vypěstovaných zoosporangií kultivovaných ve tmě při 19 °C na 1% vodním agaru lze pomocí kapiláry připevněné k mikromanipulátoru odchytávat již po 1 h kultivace. Odchycené zoospory je poté vhodné dále kultivovat na listových discích ze 12?14 dní starých děložních lístků slunečnice, Helianthus annuus cv. Peredovik, při teplotě 19 °C a fotoperiodě 12/12 h (světlo/tma), bez zatemnění po dobu prvních 12?16 h po inokulaci, v jamkách kultivačních destiček s 1 ml destilované vody. Popsanou metodou bylo vytvořeno celkem 7 monozoosporických izolátů P. halstedii, což dokazuje, že metoda je využitelná pro další práci.

Abstract:

Techniques used for Plasmopara halstedii cultivation and preparation of its single?zoospore isolates are studied and optimized in this work. Single spore isolation techniques applied in studies of various types microscopic organisms are compared, and aspects of P. halstedii biology important for successful cultivation and maintenance of the pathogen are reviewed in the initial part of this thesis. Based on experimental verification the optimal method of capillary technique for single zoospore isolation of P. halstedii is proposed as follows. First, fresh zoosporangia are cultivated on 1% agar plates in dark at 19 °C. Zoospore isolation under inverted microscope using capillary tube connected to micromanipulator can be started after 1 hour of zoosporangia cultivation. Isolated zoospores are then cultivated on cotyledon discs prepared from 12?14 days old sunflower, Helianthus annuus cv. Peredovik, at constant temperature of 19 °C, and 12/12 h (light/dark) photoperiod, omitting initial dark period of 12?16 hpi. Leaf discs are best cultivated in cultivation plates containing 1 ml of distilled water. Suitability of the proposed method was proven by successful isolation of 7 single zoospore isolates.

Klíčová slova

Plasmopara halstedii, Helianthus annuus, inokulace, kapilární technika, listový disk, zoospora

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 2. 8. 2013

Zveřejnit od: 2. 8. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Doc. RNDr. Michaela Sedlářová, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Ekologie a ochrana prostředí / Ochrana a tvorba životního prostředí