Stanovení množství transkriptu bcr/abl u chronické myeloidní leukémie

Kamila PYTLOVÁ

Bachelor's thesis

Quantitation of transcript bcr / abl in chronic myeloid leukemia

Abstract:

Tato bakalářská práce se v teoretické části zabývá onemocněním chronická myeloidní leukémie (CML), která tvoří asi 25% leukémií dospělého věku, s maximálním výskytem ve věkové skupině mezi 50 - 70. rokem života. S nízkou frekvencí se vyskytuje i u dětí a mladistvých. Chronická myeloidní leukémie je charakterizována přítomností hybridního genu bcr/abl, který vzniká v důsledku reciproké translokace t(9;22)(q34;q11) karyotypicky detekovatelné jako Ph chromozóm. Gen bcr/abl je typickým znakem CML sloužící k upřesnění diagnózy a sledování úspěšnosti léčby. Kvantifikace je prováděna buď jako relativní (častěji), kdy se množství fluorescence testovaného vzorku porovnává s množstvím fluorescence jiného genu, nebo absolutní, kdy množství DNA odečítáme z kalibrační křivky, která nám poskytne výsledek DNA o dané koncentraci. Cílem této práce je srovnat různé způsoby kvantifikace transkriptu bcr/abl. Snaha o kvantifikaci tohoto transkriptu probíhá již dlouhou dobu, zapojili se zde organizace z celého světa. Nejcitlivější metodou pro zjištění přítomnosti této aberace je reverzní transkriptázová polymerázová řetězová reakce (RT-PCR) detekující transkript bcr/abl. Druhým cílem této práce je podat přehled problematiky a provést jeden ze způsobů relativní kvantifikace genu bcr/abl. Posledním cílem je seznámení se s managementem vzorků v laboratoři a verifikací a validací těchto metod.

Abstract:

This bachelor thesis in the theoretical part deals with the disease chronic myelogenous leukemia (CML), which accounts for about 25% of the leukemia of the adult age, with maximum incidence in the age group between 50.-70. year of life. With low frequency occurs even in children and adolescents. Chronic myeloid leukemia is characterized by the presence of the hybrid gene bcr/abl, that arises as a result of reciprocal translocation t(9;22)(q34;q11) karyotypicaly detectable as a Ph chromosome. The gene bcr/abl is the hallmark of CML used to refine the diagnosis and monitoring of treatment success. Quantification is carried out either as a relative (often), when the amount of fluorescence of the test gene is compared with the amount of fluorescence of the reference gene, or absolute, when the amount of DNA we are going deduct from the calibration curve, which will provide us with a DNA sample of a given concentration. The aim of this work is to compare different ways of quantification of the transcript bcr/abl. The pursuit of quantification of this transcript has been going on for a long time, involved here organization from around the world. The most sensitive method for detection of the presence of this aberration is the reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) detecting the transcript bcr/abl. The second objective of this work is to give an overview of this issue and perform one of the methods for the relative quantification of the gene bcr/abl. The final objective is to get acquainted with the management of samples in the laboratory, and verification and validation of these methods.

Keywords

Kvantifikace transkriptu bcr/abl, chronická myeloidní leukémie, izolace RNA, RT-PCR, verifikace

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2016

Accessible from:: 3. 5. 2016

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Ondřej Scheinost

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician