Stanovení protilátek proti Lymeské borelióze, ELISA vs. Western Blot

Nikola MARHOUNOVÁ

Bachelor's thesis

Determination of antibodies against Lyme Disease, ELISA vs. Western Blot

Abstract:

Lymeská borelióza je jedno z nejčastějších onemocnění přenášené klíšťaty. Lymeská borelióza má mnoho klinických příznaků, ovšem u mnoha pacientů může probíhat i asymptomaticky. Laboratorní diagnostika tohoto onemocnění spočívá ve stanovení protilátek ve třídách IgM a IgG nejprve pomocí ELISA testu, a poté konfirmací pomocí Western blotu. Tato bakalářská práce je rozdělena na dvě části. V první, teoretické části, je popsána historie onemocnění, a patogen, který onemocnění způsobuje. Nedílnou součástí je také popis přenašeče, tedy klíštěte, a přenos původce lymeské boreliózy. Detailněji jsou popsány děje, které se odehrávají během přenosu Borrelie, a jak přitom reaguje tělo hostitele. Větší část teoretické části je věnována popisu klinických příznaků lymeské boreliózy a její laboratorní diagnostice. Jsou popsány metody přímé i nepřímé, ovšem nepřímým metodám je věnována větší část, neboť je to zadání mé bakalářské práce. V druhé, praktické části, je popsán postup obou metod nepřímé diagnostiky, tedy ELISA testu a Western blotu. Během mé praxe jsem se podílela na vyšetření 510 lidských sér, kdy jsem pomocí WB stanovovala protilátky třídy IgM a IgG. Součástí této kapitoly jsou také výsledky mé práce přehledně znázorněné v tabulkách a grafech. Protože Western blot je v klinických laboratořích používána jako konfirmační metoda, jsou počty pozitivních testů provedených touto metodou nižší než pomocí ELISA testu. ELISA test nemá tak vysokou specificitu, mnohé pozitivní testy se po konfirmaci pomocí WB ukáží jako negativní. Jde o to, že dochází k reakci s antigenem flagelinu, který se ovšem může vyskytovat i u jiných bakterií, které mají bičík. Proto je tak důležitá konfirmace pozitivních testů pomocí metody Western blot.

Abstract:

Lyme disease is one of the most common tick-borne diseases. Lyme disease has many clinical symptoms, but it can also occur asymptomatically in many patients. Laboratory diagnostics of this disease involves the determination of IgM and IgG antibodies, first by ELISA test, and then it is confirmed by Western blot. This bachelor thesis is divided into two parts. The first, theoretical part, describes the history of the disease, and the pathogen that causes the disease. Theoretical part also includes the description of the vector, the tick, as well as a transmission of Lyme disease. The events which take place during Borellia transmission and how the host body reacts, are described in more detail. Most of the theoretical part is devoted to the description of clinical symptoms of Lyme disease and to its laboratory diagnostics. Both, direct and indirect methods, are described. But a larger part is devoted to indirect methods, because it is the assignment of my bachelor thesis. In the second, practical part, the procedure of both methods of indirect diagnostics, ELISA test and Western blot,is described. During my practice, I participated in the examination of 510 of human sera. It was used Western blot test to determine IgM and IgG antibodies against Lyme disease. Results of my work are clearly shown in tables and graphs. Because Western blot is a confirmatory method in clinical laboratories, the number of positive tests performed by this method is lower than by ELISA test. ELISA test has not such a high specificity as Western blot. Many positive tests prove negative after confirmation by Western blot. It's because there is a reaction with the flagellin antigen, which, however, also occurs in other flagellate bacteria. Therefore it is important to confirm of positive tests by Western blot.

Keywords

Klíště obecné, patogen, protilátky, ELISA, Western Blot

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 11. 8. 2020

Thesis defence

• Supervisor: RNDr. Michaela Kotková

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Sciences

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician