Stanovení aminokyselin pomocí kapilární elektroforézy s fluorescenční detekcí pro metabolomické studie

Bc. Tereza Dědová

Master's thesis

Determination of Amino Acids by Capillary Electrophoresis with Fluorescence Detection for Metabolomic Studies

Anotácia:

Stanovení aminokyselin pomocí kapilární elektroforézy s fluorescenční detekcí je výhodné z několika důvodů. Zaprvé se jedná o velice senzitivní metodu, která vykazuje nízké limity detekce a vysokou specifitu. Zároveň je pro analýzu třeba velmi malé množství vzorku, zejména při využití derivatizace v kapiláře. To umožňuje stanovení vzácnějších vzorků, jako jsou kultivační média užívaná k asistované reprodukci nebo mozkomíšní mok. Naneštěstí nevykazují aminokyseliny nativní fluorescenci a k jejich detekci je tedy nutné zvolit vhodnou derivatizační metodu. Výhodné je využít takové činidlo, jež samo fluorescenci nevykazuje, ale stává se fluorescenčním po reakci s analytem. Z tohoto důvodu byl zvolen naftalen-2,3-dialdehyd. Cílem této práce bylo vyvinout metodu pro derivatizaci aminokyselin, jež by umožnila jejich následné stanovení pomocí kapilární elektroforézy s fluorescenční detekcí.

Abstract:

A capillary electrophoresis coupled with fluorescence detection is a powerful and sensitive technique for determination of amino acids. It shows low limits of detection and a high specificity. Moreover, the use of the capillary electrophoresis allows an analysis of very small amounts of sample. This is particularly useful for a study of rare samples such as a cerebrospinal fluid or culture media used in the assisted reproduction. Unfortunately, the amino acids do not have fluorescent properties. Thus, a proper derivatization technique is necessary to achieve the best results. The use of a derivatization reagent that is non-fluorescent until it reacts with an analyte is quite advantageous. A fluorogenic compound naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde has such properties. The main goal of this thesis was to develop a method for derivatization of amino acids which allows their detection with a capillary electrophoresis coupled with fluorescence detection.

Keywords

aminokyseliny, fluorescenční detekce, kapilární elektroforéza, naftalen-2, 3-dialdehyd, amino acids, fluorescence detection, capillary electrophoresis, naphthalene-2, 3-dicarboxaldehyde

Jazyk práce: English

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 13. 5. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 3. 6. 2014
• Vedúci: prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.
• Oponent: doc. RNDr. Josef Tomandl, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Biochemistry / Analytical Biochemistry