Heterodimerizace vybraných 14-3-3 izoforem

Bc. Jan Šimek

Bakalářská práce

Heterodimerization of selected 14-3-3 isoforms

Anotace:

Regulační proteiny 14-3-3 jsou intenzivně studované pro svou roli v buněčném cyklu i různých onkologických a neurodegenerativních onemocněních. Funkce 14-3-3 proteinů, přítomných prakticky v každé eukaryotické buňce, silně závisí na jejich dimerním charakteru. Existuje 7 lidských izoforem 14-3-3, které mohou tvořit homo- i heterodimery. Monomerní podjednotky různých izoforem se liší vzájemnou afinitou a schopností interagovat s různými ligandy. Zatímco homodimery 14-3-3 se zabývá velké množství publikací, heterodimerizace je mnohem méně popsaná. Cílem této práce je určit rychlostní a disociační konstanty heterodimerizací vybraných párů 14-3-3 izoforem. Pro jeho dosažení bylo provedeno několik sérií fluorimetrických experimentů, využívajících fluorescenční rezonanční přenos energie (FRET). Získaná data byla využita k určení vzájemné afinity monomerů různých izoforem a popisu kinetiky heterodimerizací, její závislosti na teplotě a iontové síle.

Abstract:

Ubiquitously expressed regulatory proteins 14-3-3 are intensively studied due to their impact on cell cycle and neurodegenerative and oncological diseases. Function of 14 3 3 proteins, which are present in all eukaryotic cells, is strongly dependent on their dimeric nature. 7 isoforms of 14-3-3 are included in human proteome. These isoforms can form homo- and heterodimers, but different isoforms differ in their propensity to dimerize. Many studies deal with 14-3-3 homodimers, but kinetics and dimer-monomer equilibrium of heterodimerization have not been quantified yet. Aim of this thesis is to determine values of rate and equilibrium constants of two heterodimerization pairs. To obtain this data, series of fluorimetric experiments based on fluorescence resonance energy transfer (FRET) were performed. Measured data allowed to evaluate influence of temperature and ionic strength on heterodimerization.

Klíčová slova

14-3-3 protein, dimerizace, fluorescence, izoformy, FRET, kinetika, rovnováha, dimerization, isoforms, kinetics, equilibrium

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 1. 6. 2021

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 9. 7. 2021
• Vedoucí: RNDr. Mgr. Jozef Hritz, Ph.D.
• Oponent: Ing. Blanka Pekárová, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie