Metody detekce ribosomálního stresu

Bc. Barbara DUCHOŇOVÁ

Diplomová práce

The ribosomal stress and its detection methods

Anotace:

Tvorba a správná funkce ribosomů je klíčová pro život každé buňky. K narušení biogeneze ribosomů může docházet důsledkem vnějších vlivů, jako jsou xenobiotika, záření aj. nebo mutacemi v DNA buňky. V druhém případě hovoříme o tzv. ribosomopatiích. Mutace v genech kódujících ribosomální proteiny vedou ke vzniku jedné z těchto ribosomopatií, Diamond-Blacfanově anémii (DBA). Cílem této diplomové práce bylo vypracovat literární rešerši na dané téma a zjistit, zda lymfoblastoidní linie (LCL) pacientů s DBA onemocněním jsou vhodné jako DBA buněčný model. Kultivací LCL kontrolního vzorku zdravého jedince a pacientů s mutacemi v ribosomálních proteinech (RP) RPS26, RPL5 a RPS19 byl získán potřebný materiál k analýzám. Zda jsou LCL linie vhodným buněčným modelem pro DBA onemocnění bylo zjišťováno pomocí pomocí: průtokové cytometrie (analýza buněčného cyklu, detekce fosforylace histonu, analýza apoptózy), Northern blot analýzy, Western blot analýzy a konfokálního mikroskopu (dvojitá RNA-FISH analýza a imunofluorescence se značeným nukleolinem a nukleofosminem). Naměřené výsledky potvrdily informace týkající se tohoto onemocnění zmíněné ve vědeckých publikacích, vyjma analýzy p53 proteinu metodou western blot. Vytvořené LCL linie jsou vhodným buněčným modelem DBA.

Abstract:

The biogenesis and proper functioning of ribosomes is a key to the life of every eukaryotic cell. Disruption of ribosome biogenesis may occur as a result of external influences such as xenobiotics, radiation, etc., or could be caused by mutations in cell DNA. In the latter case, we are talking about so-called ribosomopathies. Mutations in genes encoding ribosomal proteins lead to one of these ribosomopathies, Diamond-Blackfan anemia (DBA). The aim of this Master thesis was to develop a literary review on the given topic. Aim of practical part was confirm that lymphoblastoid cell lines (LCLs) derivated from DBA patients are suitable DBA cellular model. Material for analysis was obtained from the control sample of a healthy individual and patients with mutations in ribosomal proteins (RP) RPS26, RPL5 and RPS19. Suitability of LCL as DBA cellular model was analysed by following methods: flow cytometry (analysis of cell cycle, histone phosphorylation and apoptosis), Northern blot analysis, Western blot analysis and confocal microscope (double RNA-FISH analysis and immunofluorescence staining with nucleolin and nucleophosmin). All results, except for p53 western blot analysis, agreed with literature. Taking all together, LCL are suitable DBA cellular model.

Klíčová slova

jadérko, ribosomální biogeneze, ribosomální stres, Diamond-Blackfanova anémie, lymfoblastoidní linie

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 11. 5. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Bc. Zuzana Macečková

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie