Produkce rekombinantní TEV proteasy v E. coli

Ing. Aleš KREJČÍ

Diplomová práce

Production of recombinant TEV protease in E. coli

Anotace:

Jedním z hlavních cílů mé diplomové práce je provést totální syntézu genu TEV proteasy, a to pomocí komerčně získaných oligonukleotidů. Dalším bodem je optimalizovat podmínky produkce rekombinantní TEV proteasy a pro získaný protein nalézt co nejvhodnější purifikační postup s použitím různých druhů chromatografií, jako je afinitní chromatografie na imobilizovaných iontech kovů, chromatografie na iontoměničích či gelová permeační chromatografie. Nakonec je potřeba stanovit kinetické parametry (KM, kcat) jak získané, tak komerčně dodávané TEV proteasy a výsledky z obou enzymových kinetik vzájemně porovnat.

Abstract:

One of chief aims of my diploma work is make total gene synthesis of TEV protease by means of commercially available oligonucleotides. Another point is optimize conditions for production of recombinant TEV protease and find most suitable purification procedure for the obtained protein with using different kinds of chromatographies, such as immobilized metal affinity chromatography, ion exchange chromatography or gel permeation chromatography. Last point is determine kinetic parameters (KM, kcat) both obtained and commercially available TEV protease and compare the results of both enzymatic kinetics.

Klíčová slova

TEV proteasa, oligonukleotidy, purifikace proteinu, chromatografie, kinetické parametry

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 19. 5. 2008

Zveřejnit od: 19. 5. 2008

Identifikátor: 8565

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 17. 6. 2008
• Vedoucí: doc. Mgr. Marek Koutný, Ph.D.

Univerzita Tomáše Bati ve Zlíně

Fakulta technologická

Magisterský studijní program / obor:
Chemie a technologie materiálů / Inženýrství ochrany životního prostředí