Interakce lektinu AFL s přirozenými vazebnými partnery

Bc. Hana Zpěváková

Diplomová práce

Interaction of AFL lectin with natural binding partners

Anotace:

Aspergillus fumigatus je všudypřítomná patogenní plíseň způsobující různě závažná onemocnění pacientů s imunodeficiencí. Míra závažnosti způsobovaných onemocnění stoupá kvůli zvyšujícímu se množství osob s poruchami imunity, ale i vzhledem k tomu, že se začíná projevovat odolnost plísně vůči používaným terapeutikům. Zkoumaný lektin AFL, produkovaný plísní na povrchu konidií, je rozpoznáván imunitním systémem, a tedy by pochopení mechanismů s ním spojených mohlo usnadnit vývoj nových, účinnějších léčiv. Cílem této práce bylo nalézt vazebné partnery AFL v lidských krevních buňkách. K tomu byly použity metody fluorescenční mikroskopie, lektinového imunoblotu a koimunoprecipitace. Fluorescenční mikroskopií byla prokázána vazba lektinu na povrchové epitopy krevních buněk. Epitopy pak byly blíže analyzovány imunoblotem a koimunnoprecipitací. Metodou koimunoprecipitace byly potenciální vazebné partnery v membránách bílých krvinek nalezeny a předány k identifikaci metodou hmotnostní spektrometrie.

Abstract:

Aspergillus fumigatus is ubiquitous pathogenic mould that causes various severe diseases in immunodeficient pacients. Severity of these diseases is increasing due to growing number of people with immunity disorders and also due to rising resistance of mould towards therapeutics in use. Studied lectin AFL, produced by mould on its conidial surface, is recognized by immune system and therefore understanding of mechanisms connected to it could be helpful in development of new, more effective drugs. Aim of this study is to find binding partners of AFL in human blood cells. To achieve this goal methods of fluorescent microscopy, lectin immunoblott and co-immunoprecipitation were applied. Fluorescence microscopy proved linkage of lectin to surface epitopes of blood cells. These epitopes were then closely analyzed by immunoblotting and co–immunoprecipitation. Potencial binding partners in membranes of white blood cells were found by co–immunoprecipitation and they were passed down to mass spectrometry identification.

Klíčová slova

Aspergillus fumigatus, AFL, krevní buňky, fluorescenční mikroskopie, lektinový imunoblot, koimunoprecipitace, blood cells, fluorescence microscopy, lectin immunoblotting, co–immunoprecipitation

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 16. 5. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 4. 6. 2018
• Vedoucí: Mgr. Josef Houser, Ph.D., prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D.
• Oponent: Mgr. Lenka Malinovská, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie