Genetická modifikace Claviceps purpurea

Věra JURAČKOVÁ

Bakalářská práce

Genetic modification of Claviceps purpurea

Anotace:

C. purpurea je parazitická houba produkující námelové alkaloidy, které jsou využívány ve farmaceutickém průmyslu pro výrobu léků. Zvýšení produkce námelových alkaloidů u C. purpurea by mohlo být dosaženo zvýšenou expresí genů zapojených do jejich biosyntetické cesty. Slibným kandidátem pro dosažení tohoto cíle je gen cloA, jehož produkt katalyzuje v biosyntetické cestě námelových alkaloidů přeměnu elymoclavinu na kyselinu paspalovou. V této bakalářské práci byl amplifikován a izolován gen cloA, který byl vložen do pDrive vektoru. Sekvence tohoto genu byla porovnána s referenční sekvencí. Gen cloA byl následně klonován do plasmidů pMK a p444, se kterými se bude dále pracovat za účelem použití pro transformaci C. purpurea. Protoplasty dvou kmenů C. purpurea byly transformovány konstruktem p444::easG, s cílem zvýšit expresi genu easG, který je rovněž zapojen do biosyntézy alkaloidů. Úšpěšnost transformace nebyla potvrzena, protože antibiotikum použité pro selekci transformovaných protoplastů nebylo účinné.

Abstract:

C. purpurea is a parasitic fungus producing ergot alkaloids, which can be used in the pharmaceutical industry for the production of medicaments. Increasing the ergot alkaloid production in C. purpurea can be achieved by overexpression of the genes involved in ergot alkaloid biosynthetic pathway. A promising target for the genetic modification is the gene cloA, coding for the enzyme catalyzing conversion of elymoclavine to paspalic acid. Gene cloA was amplified and inserted into pDrive vector. The sequence of the gene was compared to a reference sequence. The gene was then cloned into the plasmids pMK and p444. However, an additional cloning has to be done to obtain complete plasmid for the transformation. Protoplasts of two C. purpurea strains were transformed by using the construct p444::easG, to overexpress gene easG, which is also involved in alkaloid biosynthetic pathway. The success of the transformation was not confirmed, because the antibiotic used for selection of transformed protoplasts was found to be ineffective.

Klíčová slova

Claviceps purpurea, biosyntéza námelových alkaloidů, cloA, transformace

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 5. 2014

Zveřejnit od: 15. 5. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 9. 6. 2014
• Vedoucí: Mgr. Mária Čudejková

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie