Stanovení ampicilinu v lidské krevní plazmě pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie

Bc. Vendula KUBÍČKOVÁ

Diplomová práce

Determination of ampicillin in human blood plasma using high performance liquid chromatography

Anotace:

Ampicilin je širokospektré aminopenicilinové antibiotikum s baktericidním účinkem indikované při léčbě bakteriálních infekcí i jako profylaktické zajištění. Cílem práce je zavedení metody pro stanovení ampicilinu v lidské krevní plazmě pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie a popsání změny kinetiky antibiotika podávaného jako profylaktické zajištění při kardiochirurgických operacích s využitím mimotělního oběhu. Práce obsahuje literární rešerši s informacemi o vlastnostech ampicilinu a způsobech jeho stanovení, dále pak seznamuje s použitým přístrojem a popisuje specifika mimotělního oběhu. Druhá část práce je experimentální a obsahuje popis zavedení metody stanovení ampicilinu ve vzorku krevní plazmy a následně kalibraci a validaci metody. Pro extrakci ampicilinu z krevní plazmy byla využita metoda SPE s použitím kolonek DSC C18. K měření na HPLC byla využita kolona C18 Polar, 250 x 4,6 mm s 5 m částicemi a isokratickou elucí. Práce se také zabývá stabilitou ampicilinu v roztoku a proměřením jeho volné a vázané frakce. Pokud je roztok ampicilinu s krevní plazmou zmrazen, nevykazuje ani po třech měsících známky degradace. Procento vázané frakce ampicilinu poté byla shodná s hodnotami deklarovanými literaturou. Poslední část práce byla zaměřena na proměření pacientských vzorků získaných během kardiovaskulární operace s využitím mimotělního oběhu. Výsledky ukazují, že současné dávkování antibiotika je dostatečné, úprava dávkování je nutná v případě vyšší tělesné hmotnosti pacienta. Zavedená metoda pro stanovení ampicilinu je přesná, správná a použitelná v praxi, umožňující získání optimálního dávkování léčiva u pacientů.

Abstract:

Ampicillin is a broad-spectrum aminopenicillin antibiotic with a bactericidal effect, indicated in the treatment of bacterial infections and as a prophylactic antibiotic. The aim of the thesis is to introduce a method for the determination of ampicillin in human blood plasma by using of high performance liquid chromatography and to describe the change of antibiotic kinetics indicated as a prophylactic in cardiac surgery with using extracorporeal circulation. The thesis contains a review with information about the properties of ampicillin and the methods of its determination, then it introduces the instrument used and describes the specifics of extracorporeal circulation. The second part of the thesis is experimental and contains the introduction of the method of determination of ampicillin in the blood plasma sample and subsequently the calibration and validation of the method. SPE was used to extract ampicillin from blood plasma using DSC C18 columns. A HPLC C18 Polar column, 250 x 4.6 mm with 5 ?m particles and isocratic elution was used for HPLC measurements. The thesis also deals with the stability of ampicillin in blood plasma and the measurement of its free and bound fraction. If the ampicillin solution with blood plasma is frozen, it does not show signs of degradation even after three months. The percent bound ampicillin fraction was then consistent with the values reported by the literature. The last part of the thesis was focused on the measurement of patient samples obtained during cardiovascular surgery using extracorporeal circulation. The results show that the current antibiotic dosage is sufficient, adjustment dosage is necessary in case of higher patient body weight. The introduced method for the determination of ampicillin is accurate, correct and practicable, allowing optimal dosing of antibiotic to patients.

Klíčová slova

Ampicilin, cefalexin, sulbaktam, stanovení ampicilinu, HPLC, mimotělní oběh

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 30. 4. 2019

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Zuzana Rácová, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Experimentální biologie