Imobilizace lektinu AFL jako nástroj pro studium jeho možných vazebných partnerů

Bc. Hana Zpěváková

Bachelor's thesis

AFL lectin immobilization as a tool for study of its potential binding partners

Anotácia:

Kvůli zvýšenému počtu pacientů s imunodeficiencí se v poslední době stává významným lidským patogenem plíseň Aspergillus fumigatus. Konidie, které jsou hlavní příčinou infekce, mají na svém povrchu strukturu s hemaglutinační aktivitou. Tato struktura byla identifikována jako lektin AFL (rovněž známý jako FleA). Lektin AFL je považovaný za potenciální virulentní faktor, protože může zprostředkovávat adhezi konidie na hostitelské buňky. Cílem této práce bylo zkoumat interakce AFL s konidiemi na úrovni molekul. Lektin byl získán pomocí exprese plazmidu pET29–afl v buňkách E. coli BL21(DE3)Gold. Následně byla ověřena jeho aktivita, poté byl biotinylován a imobilizován pomocí interakce biotin – streptavidin na nosič. Bylo dokázáno, že imobilizovaný lektin si zachoval schopnost vázat fukosylované proteiny. Na závěr byl lektin podroben inkubaci s lyzátem konidií A. fumigatus. Při prvotním testu však nebyla pozorována žádná interakce.

Abstract:

Mould Aspergillus fumigatus is lately becoming a significant human pathogen due to an increased rate of patients with immunodeficiency. Conidia, the main reason of A. fumigatus infections, have an agens possessing a hemagglutination activity on their surface. This structure was identified as a lectin AFL (also known as FleA) and it is considered as a possible virulence factor, because it may have a role in adhesion of conidia to host cells. Aim of this bachelor thesis was to study interactions between AFL and conidia on molecular level. Active lectin obtained during expression of plasmid pET29-afl in cells of E. coli BL21(DE3)Gold was immobilised trough biotin – streptavidin bonding to magnetic beads. As it was demonstrated, the immobilised lectin was still able to bind fucosylated proteins. At last the lectin was incubated with lysate of A. fumigatus conidia, however no interactions were observed during this prime experiment.

Kľúčové slová

Aspergillus fumigatus, lektiny, AFL, imobilizace, vazební partneři AFL, lectins, immobilization, binding partners of AFL

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 18. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 16. 2. 2016
• Vedúci: prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D., Mgr. Josef Houser, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Applied Biochemistry / Applied Biochemistry