Identifikace protilátkové odpovědi na proteiny salmonel

Bc. Jan Gebauer, Ph.D.

Diplomová práce

Identification of antibody response to salmonella proteins

Anotace:

Salmonelové infekce jsou v humánní i veterinární medicíně dlouhodobým problémem. Důležitým postupem v boji proti těmto bakteriálním infekcím je aplikace vakcín. Ty jsou obecně založeny na indukci dlouhotrvající protektivity imunitního systému vakcinovaného jedince. Důležitou součástí je tvorba dlouho žijících specifických protilátek proti konkrétním strukturám patogena. Tato diplomová práce se zabývá popisem protilátkové imunitní odpovědi prasat po jejich experimentální infekci různými sérotypy bakteriálního kmene Salmonella enterica subsp. enterica. Pomocí dvourozměrné elektroforézy ve spojení s western-blotem byly nalezeny rozdíly v protilátkových profilech v sérech zvířat před a po infekci. Poté byly použitím hmotnostní spektrometrie (LC-MS/MS) identifikovány salmonelové proteiny, které tvořily imunokomplexy s protilátkami, nacházejícími se pouze v sérech infikovaných zvířat. V každém vzorku z vyřezané PVDF membrány však bylo nalezeno více signifikantních proteinů, které byly na gelu ve stejné oblasti. Touto metodou nelze blíže určit, který z nalezených proteinů je skutečně odpovědný za tvorbu imunokomplexu. Další experimenty jsou nutné pro detailní identifikaci proteinů, které vyvolaly tvorbu specifických protilátek.

Abstract:

Salmonella infections constitute a persistent problem in human and veterinary medicine. Vaccine administration is an important technique in fighting against these bacterial infections. Vaccines are generally based on inducing protective and long-lasting immunity in the host. Formation of long-lived antibodies against specific pathogen structures plays a crucial role in the immune response of vaccinated subjects. In this thesis we studied the antibody immune response of swine after experimental infection with different serotypes of Salmonella enterica subsp. enterica strains. Using two-dimensional electrophoresis and immunoblotting we found differences in antibody profiles of sera from animals prior to infection and post-infection. By mass spectrometry (LC-MS/MS) we then determined Salmonella proteins which had formed immune complexes with antibodies unique to infected animal sera. In each sample of excised PVDF membrane we found more significant proteins located in the same area of gel. This method does not allow to determine which of the identified proteins is responsible for the immune complex formation. Further experiments are necessary for detailed identification of proteins which had induced the antibody production.

Klíčová slova

Salmonella, LPS, Omp proteiny, protilátková odpověď, vakcíny, identifikace proteinů, hmotnostní spektrometrie / Salmonella, Omp proteins, antibody response, vaccines, protein identification, mass spectrometry

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 14. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 6. 6. 2012
• Vedoucí: MVDr. Martin Faldyna, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie