Vývoj metody pro stanovení antiepileptik pomocí kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní detekcí

Bc. Veronika ŠVIDRNOCHOVÁ

Master's thesis

Development of methods for determination of antiepileptic drugs by liquid chromatography coupled with mass spectrometry

Abstract:

Antiepileptika jsou léčiva používaná k potlačení epileptických záchvatů, léčbě bolesti a při psychiatrických poruchách. Pro nastavení optimální dávky léčiva pacientovi, je důležité monitorovat koncentraci těchto léčiv v organismu. Tato práce se zabývá vývojem metody pro stanovení vybraných antiepileptik (primidonu, fenobarbitalu, fenytoinu, karbamazepinu, epoxy-karbamazepinu, lamotriginu, zonisamidu, topiramatu, lacosamidu, rufinamidu, sultiamu a stiripentolu) v krevním séru, validací této metody a zavedením do rutinní praxe. Chromatografická analýza probíhala na UPLC/MS systému Acquity UPLC H/QDA. K separaci byla použita kolona Kinetex 1,7 ?m C18 100 A (100 x 2,1 mm) nastavena na teplotu 40 °C. Bylo nalezeno optimální složení mobilní fáze a gradientová eluce. Nástřik vzorku byl nastaven na objem 5 ?l. Velká pozornost byla věnována testování ideální přípravy vzorků precipitací proteinů. Následně byla provedena validace vyvinuté metody. Byly stanoveny limity kvantifikace (1 mg/l pro PD, CMZ, ZNA a TOP, 2,4 mg/l pro PB, 2 mg/l pro DPH a 0,5 mg/l pro EPO, LAM, LAC, RUF, SUL a STR), linearita (R > 0,990), opakovatelnost a mezilehlá přesnost (RSD < ?15 %) a správnost (odchylka nižší než ? 20 %). Na základě validačních parametrů lze vyvinutou metodu považovat za přesnou, správnou a použitelnou v rutinní praxi. V poslední fázi byla metoda aplikována na reálné vzorky krevního séra pacientů a naměřené koncentrace byly porovnány s koncentracemi naměřenými metodou HPLC-UV/VIS.

Abstract:

Antiepileptics are drugs which are used to suppress epileptic seizures, pain treatment and psychiatric disorders. It´s important to monitor the concentration of these drugs in serum, to set the optimal dose of the drug to a patient. This thesis deals with development of a method for determination of antiepileptic drugs (primidone, phenobarbital, phenytoin, carbamazepine, carbamazepine-10,11-epoxide, lamotrigine, zonisamide, topiramate, lacosamide, rufinamide, sulthiame and stiripentol), validation of this method and introduction into routine practice. An Acquity UPLC H-Class/QDA was used. Chromatographic separation was achieved on a Kinetex 1,7 ?m C18 100 A (100 x 2,1 mm) adjusted to 40 °C. Optimal mobile phase composition and gradient elution were found. 5 ?l of sample was injected into the UPLC/MS system. Great attention has been paid to testing the ideal preparation of samples by precipitating the protein. Validation of an optimized method was performed after that. Limits of quantification (1 mg/l for PD, CMZ, ZNA and TOP, 2,4 mg/l for PB, 2 mg/l for DPH and 0,5 mg/l for EPO, LAM, LAC, RUF, SUL and STR), repeatability and intermediate accuracy (RSD < ? 15 %) and accuracy (deviation lower than ? 20 %) were determined. Based on the validation parameters the development method could be considered accure, correct and usable in routine practice. In conclusion, the method was applied on samples of patients blood serum and measured concentrations were compared with the concentrations measured by the HPLC-UV/VIS.

Keywords

antiepileptika, kapalinová chromatografie, hmotnostní spektrometrie, terapeutické monitorování hladiny léčiv

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 23. 4. 2018

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Romana Uřinovská, Ph.D.

University of Ostrava

Faculty of Science

Master programme / field:
Chemistry / Analytical Chemistry of Solid Phase