Příprava a strukturně-funkční charakterizace houbových lektinů

Bc. Jitka Ždánská

Diplomová práce

Preparation and structure-functional characterization of fungal lectins

Anotace:

Diplomová práce se zabývá hypotetickým lektinem AFL2 pocházejícím z plísně Aspergillus fumigatus. Lektin nebyl doposud získán v rozpustné formě a z toho důvodu nebyl ani strukturně charakterizován. Cílem diplomové práce bylo optimalizovat podmínky potřebné pro produkci proteinu AFL2 v rozpustné formě. Byla zkoumána afinita lektinu za použití několika druhů afinitní chromatografie. Během výzkumu byl testován protein His6-AFL2 s oligohistidinovou kotvou na N-konci a protein Thio_Tev-AFL2 s modifikovaným thioredoxinem. Konstrukt genu afl2 a vektoru obsahující gen pro thioredoxin se ukázal jako nejlepším řešením pro problémy s rozpustností proteinu. Bohužel ani v tomto konstruktu se nepodařilo protein purifikovat.

Abstract:

This thesis is focused on a hypothetical lectin AFL2 from Aspergillus fumigatus. This lectin was not obtained in soluble form which prevented its structural analysis. The main goal of this thesis was to optimize the conditions required for the production of the AFL2 protein in a soluble form. Protein ineractions were studied using several affinity chromatography methods. Two types of constructs were studied during this research; the His6-AFL2 protein with N-terminal oligohistidine tag and the Thio_Tev-AFL2 protein with modified thioredoxin. The second construct of the afl2 gene in pRSET vector showed to be the solution for solving the problem of AFL2 protein solubility. However, the purification of protein Thio_Tev-AFL2 was unsuccessful.

Klíčová slova

Aspergillus fumigatus, lektin, purifikace proteinu, exprese, protein, lectin, protein purification, protein expression

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 18. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 2. 6. 2015
• Vedoucí: prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Analytická biochemie