Vliv kombinace inhibitorů histonových deacetyláz na expresi vybraného koaktivátoru ze skupiny regulačních proteinů u na androgenech-nezávislé prostatické nádorové buněčné linie s expresí androgenového receptoru (AR)

Bc. Ivana TREFILÍKOVÁ

Master's thesis

The effect of combinations of histone deacetylases inhibitors on coactivator expression detected in androgen-independent prostate cancer cells with androgen receptor expression

Abstract:

Nádorová onemocnění prostaty úzce souvisí s aktivitou androgenového receptoru a jsou spojována také se zvýšenou expresí koaktivátorů AR. Je prokázáno, že inhibitory histonových deacetyláz (HDACs) mají protinádorové účinky, proto je tato diplomová práce zaměřena na vliv kombinace dvou inhibitorů HDACs - tributyrinu a trichostatinu A - na expresi koaktivátorů SRC-1 a p300, androgenového receptoru a PSA. Buňky dvou prostatických linií, nádorové linie nezávislé na androgenech a exprimující AR (C4-2), a nenádorové buněčné linie (RWPE-1), byly ovlivňovány třemi různými kombinacemi tributyrinu (TB) a trichostatinu A (TSA). Z takto ovlivněných a kontrolních neovlivněných buněk byla izolována RNA a cDNA byla po reverzní transkripci analyzována pomocí real-time PCR. Pro analýzu na proteinové úrovni byl získáván celkový proteinový lyzát včetně chromatinu a proteinový lyzát z buněčné cytosolické frakce. Po ovlivnění buněk kombinacemi inhibitorů HDACs byly u nádorových buněk pozorovány změny v expresi AR a PSA. Na úrovni RNA byla oproti kontrolním neovlivněným buňkám detekována snížená exprese AR, která se u 96-hodinové inkubace s rostoucími koncentracemi TB zvyšovala. Byla zjištěna klesající exprese PSA, ale tento pokles nebyl potvrzen na proteinové úrovni. U nenádorových buněk RWPE-1 nebyla po jejich ovlivnění exprese AR ani PSA detekována. Kombinace uvedených inhibitorů HDACs má vliv na expresi koaktivátorů AR u nádorových C4-2 i nenádorových RWPE-1 prostatických buněk. U buněk linie C4-2 byla zaznamenána zvyšující se exprese SRC-1 a p300 v závislosti na rostoucí koncentraci TB. U ovlivněných buněk linie RWPE-1 byla exprese těchto koaktivátorů zvýšená.

Abstract:

Development of prostate cancer depends on an activation of the androgen receptor (AR). Increased expression of coregulator proteins of the AR - coactivators could modulate the AR gene activity. The histone deacetylases (HDACs) inhibitors: tributyrin and trichostatin A have an anticancer effect. Therefore, the diploma thesis is focused on a study of the effect of combinations of these two HDACs inhibitors on gene expression of the SRC-1 and p300 coactivators as well as on the androgen receptor and PSA gene expressions. Two prostate cell lines, androgen-independent prostate cancer cell line with AR gene expression - C4-2 and non-tumorigenic cell line - RWPE-1 were treated with three different combinations of tributyrin (TB) and trichostatin A (TSA). RNA was isolated from treated and un-treated control cells and cDNA obtained after reverse trancription was analysed by real-time PCR. Total protein lysate including chromatin and cell lysate from the cytosolic fraction were used for western blot analysis. Treatment of cancer cells with combinations of the HDACs inhibitors induced changes in AR and PSA gene expressions. Reduced AR gene expression when compared with control un-treated cells was detected at RNA level. As was shown after 96-hours incubation, the reduced AR gene expression was increased with increasing concentration of TB. Simultaneously, a reduced PSA gene expression was observed, but it was not confirmed at the protein level. AR and PSA gene expressions were not detected in treated non-tumorigenic RWPE-1 cells. The combination of these two inhibitors HDACs has an effect on AR gene coactivators expression in both cancer C4-2 and non-tumorigenic RWPE-1 prostate cells. In C4-2 cells, SRC-1 and p300 gene expressions were increased with increasing TB concentrations. Similarly, expressions of these two coactiovators were also increased in treated RWPE-1 cells.

Keywords

androgenový receptor, koaktivátor SRC-1, nádor prostaty, inhibitory histonových deacetyláz, tributyrin, trichostatin A

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 23. 4. 2012

Accessible from:: 23. 4. 2012

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Kateřina Trtková, CSc.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology