Detekce a charakterizace klíšťaty přenášených bakteriálních patogenů

Bc. Lenka Tomková

Diplomová práce

Detection and characterization of tick-borne bacterial pathogens

Anotace:

Cílem této diplomové práce bylo detekovat a geneticky charakterizovat bakteriální patogeny přenášené klíšťaty rodu Rhipicephalus, se zaměřením na zástupce rodu Rickettsia a druh Anaplasma phagocytophilum. Klíšťata byla odebrána na Sicílii ze dvou typů hostitelů, z domácích psů (Canis lupus familiaris) a zajíců korsických (Lepus corsicanus). Morfologická identifikace klíšťat byla v rámci této práce doplněna o molekulární analýzy markerů 12S rRNA a COI. Na základě těchto analýz byla většina klíšťat určena jako druh Rhipicephalus sanguineus sensu stricto, Rhipicephalus secundus u čtyřech klíšťat ze psů a jako Rhipicephalus rossicus u jednoho klíštěte ze zajíce. Celkem bylo na přítomnost vybraných patogenů testováno 124 vzorků DNA, z nichž pět (4 %) bylo pozitivních na Rickettsia spp. a jeden vzorek (0,8 %) na Anaplasma phagocytophilum. Čtyři vzorky rickettsií byly na základě sekvenace a fylogenetické analýzy fragmentů genů gltA a ompA určeny jako Rickettsia massiliae, u jednoho vzorku byla tato identifikace potvrzena i sekvenací fragmentu genu ompB. Jeden vzorek byl na základě sekvenace genu gltA identifikován jako Rickettsia felis. U vzorku pozitivního na A. phagocytophilum byl detekován ekotyp I, který má zoonotický potenciál. Výsledky potvrzují stabilní výskyt R. massiliae v oblasti Středomoří a upozorňují na možnost výskytu i méně očekávaných druhů, jako je R. felis v klíšťatech rodu Rhipicephalus. Detekce A. phagocytophilum v Rh. sanguineus s.s., který není typickým vektorem, dále poukazuje na možný širší ekologický rámec přenosu tohoto patogenu. Důraz byl kladen na přesné druhové určení klíšťat, které je nezbytné pro správnou interpretaci ekologických a epidemiologických souvislostí. Práce přináší nové poznatky o výskytu, druhovém složení a genetické diverzitě patogenů i klíšťat rodu Rhipicephalus v oblasti jižní Evropy.

Abstract:

The aim of this thesis was to detect and genetically characterize bacterial pathogens transmitted by ticks of the genus Rhipicephalus, with a focus on members of the genus Rickettsia and the species Anaplasma phagocytophilum. Ticks were collected in Sicily from two types of hosts, domestic dogs (Canis lupus familiaris) and Corsican hares (Lepus corsicanus). Morphological identification of ticks was complemented by molecular analyses using 12S rRNA and COI markers. Based on these analyses, the majority of ticks were identified as Rhipicephalus sanguineus sensu stricto, four ticks from dogs were identified as Rhipicephalus secundus, and one tick from a hare as Rhipicephalus rossicus. A total of 124 DNA samples were tested for the presence of selected pathogens. Five samples (4%) tested positive for Rickettsia spp. and one sample (0.8%) for Anaplasma phagocytophilum. Four Rickettsia-positive samples were identified as Rickettsia massiliae based on sequencing and phylogenetic analysis of gltA and ompA gene fragments; in one case, this identification was further confirmed by sequencing a fragment of the ompB gene. One sample was identified as Rickettsia felis based on gltA gene sequencing. The A. phagocytophilum-positive sample was classified as ecotype I, which has zoonotic potential. The results confirm the stable presence of R. massiliae in the Mediterranean region and highlight the possibility of less expected species such as R. felis in ticks of the genus Rhipicephalus. The detection of A. phagocytophilum in Rh. sanguineus s.s., a species not typically considered a vector, suggests a potentially broader ecological context for the transmission of this pathogen. Emphasis was placed on accurate species identification of ticks, which is essential for correct interpretation of the ecological and epidemiological context. This study provides new insights into the occurrence, species composition and genetic diversity of the pathogen and ticks of the genus Rhipicephalus in the southern European region.

Klíčová slova

klíšťaty přenášené patogeny, Anaplasma phagocytophilum, Rhipicephalus sanguineus s.s., nested PCR, Rickettsia spp.

Keywords

tick-borne pathogens, Rickettsia spp., nested PCR, Anaplasma phagocytophilum, Rhipicephalus sanguineus s.s.

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 25. 4. 2025

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 5. 6. 2025
• Vedoucí: Mgr. Kristýna Hrazdilová, Ph.D.
• Oponent: Markéta Nováková, externi

Mendelova univerzita v Brně

Agronomická fakulta

Magisterský studijní program / specializace:
Molekulární biologie a biotechnologie / Molekulární biologie a biotechnologie živočichů