Stanovení mitotanu a jeho aktivního metabolitu metodou kapalinové chromatografie

Kateřina BONCZKOVÁ

Bachelor's thesis

Determination of mitotane and its active metabolite by liquid chromatography

Abstract:

Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout a validovat metodu HPLC pro stanovení mitotanu a jeho dvou metabolitů aktivního (DDE) a neaktivního (DDA) v pacientském séru. Metoda kapalinové chromatografie využívá mobilní fázi, která je tvořena acetonitrilem a vodou v poměru 80:20 s výsledným pH 3,65. K separaci testovaných látek byla použita chromatografická kolona 150 x 3 mm s velikostí částic 5 ?m. Detekce probíhala spektrofotometricky, při vlnové délce 240 nm. Celková doba analýzy byla 12 minut. Během validace byla měřena linearita, opakovatelnost, preciznost, mezilehlá přesnost a selektivita. Přesnost metody vyjádřena pomocí variačního koeficientu byla pro DDD 2,21 - 5,28 %, pro DDE 2,28 - 3,37 % a pro DDA 3,61 - 5,86 %. Správnost metody, která byla stanovena jako opakovatelnost je pro DDD 98,7 - 106,0 %, pro DDE 103,9 - 109,2 % a pro DDA 102,96 - 111,4 %. Metoda byla otestována 24 reálnými pacientskými vzorky.

Abstract:

The aim of this bachelor´s thesis was to validate an HPLC method for determination of mitotane and its two metabolites active (DDE) and non-active (DDA) in patient serum. The liquid chromatography method uses a mobile phase consisting of acetonitrile and water in the ratio of 80:20 with pH of 3,65. A chromatographic column 150 x 3 mm with particle size 5 ?m was used for separation. Detection was performed spectrophotometrically, at a wavelength of 240 nm. The time of analysis was 12 minutes. During method validation were measured linearity repeatability, precision and selectivity. Precision expressed using the coefficient of variation was for DDD 2,21 - 5,28 %, for DDE 2,28 - 3,37 % and for DDA 3,61 - 5,86 %. The accuracy which was determinated as repeatability is for DDD 98,7 - 106,0 %, for DDE 103,9 - 109,2 % and for DDA 102,96 - 111,4 %. The method was tested by measuring 24 real patient samples.

Keywords

HPLC, mitotan(o, p?-DDD), metabolit mitotanu (DDE), vnitřní standard (2, 4?-DDT), validace

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 18. 4. 2018

Thesis defence

• Date of defence: 31. 5. 2018
• Supervisor: RNDr. Hana Brozmanová, CSc., Mgr. Romana Uřinovská, Ph.D.

University of Ostrava

Faculty of Medicine

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Laboratory Assistant