KLONOVÁNÍ HISTIDIN KINÁSOVÝCH RECEPTORŮ Z ARABIDOPSIS THALIANA A PŘÍPRAVA EXPRESNÍCH VEKTORŮ POD NATIVNÍM A KONSTITUTIVNÍM PROMOTOREM

Tereza SLANINOVÁ

Bakalářská práce

CLONING OF HISTIDINE KINASE RECEPTORS FROM ARABIDOPSIS THALIANA AND PREPARATION OF EXPRESSION VECTORS UNDER THE CONTROL OF NATIVE AND CONSTITUTIVE PROMOTERS

Anotace:

Cytokininy patří do třídy fytohormonů, které mají klíčovou roli v průběhu rostlinného života. Ovlivňují buněčné dělení, regulaci růstu a větvení prýtu a kořene, vývoj chloroplastů a regulují další důležité procesy v rostlině. V Arabidopsis jsou cytokininy vnímány třemi histidin kinasami - CRE1/WOL/AHK4, AHK2 a AHK3, které zahajují intracelulární fosfátový přenos. Konečným krokem přenosu signálu je exprese cílových genů regulujících metabolismus cytokininů a další návazné procesy. Prvním krokem této práce byla PCR amplifikace histidin kinasových receptorů AHK3 a AHK4 a jejich promotorových oblastí z rostliny Arabidopsis thaliana. Vyizolované AHK receptory a promotory byly rekombinovány BP reakcí s pDONR vektory pomocí systému MultiSite Gateway. Rekombinantní směs byla podrobena transformaci a následně byla provedena minipreparativní izolace plasmidové DNA. Cílem bylo získání tzv. ,,entry klonů", obsahující klonované geny a promotory. Entry klony byly podrobeny kontrolní sekvenaci a následně byly použity pro další rekombinantní LR reakce s cílovým vektorem (pK7m34GW) pro získání N-terminálních GFP fúzí. Touto reakcí byly získány finální expresní vektory, které je možno použít pro transformaci rostlin.

Abstract:

Cytokinins belong to a class of phytohormones that play a key role in plant development. They promote cell division, regulate growth and are also involved in shoot and root branching, chloroplast development and other processes in plants. In Arabidopsis cytokinins are recognized by receptor histidine kinases - CRE1/WOL/AHK4, AHK2 and AHK3 which initiate intracellular phosphate transfer. The final step in signal transduction is expression of target genes involved in the regulation of cytokinin metabolism and other processes. The first part of the project was PCR amplification of histidine kinase receptors AHK3 and AHK4 and their promoter regions from Arabidopsis thaliana. The recombination of isolated AHK receptors and promoters was achieved by BP reaction with pDONR vectors (used a system MultiSite Gateway). Afterwards, the sample was transformed and MiniPrep isolation of plasmid DNA was performed. The goal was obtaining of ?entry clones? containing inserted genes and promoters. Entry clones were checked by sequencing and used for another recombination LR reactions with the destination vector (pK7m34GW) to obtain N-terminal GFP fusions. The reaction was successful and the expression vectors were gained and those can be used in plant transformation.

Klíčová slova

Cytokininy, cytokininové receptory, signální dráha

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 31. 7. 2012

Zveřejnit od: 31. 7. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: RNDr. Ondřej Plíhal, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie