Stanovení vybraných monoaminů pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí

Mgr. Vítězslav Klíma

Bachelor's thesis

Determination of selected monoamines using HPLC with electrochemical detection

Abstract:

V této bakalářské práci se věnuji stanovení hormonů monoaminové povahy pomocí kapalinové chromatografie s reverzní fází a elektrochemickou detekcí. V teoretické části jsou nastíněny jednotlivé metody, kterými lze monoaminy stanovit, přičemž jsou zde podrobněji popsány metody, kdy byla využita pro separaci kapalinová chromatografie na reverzní fázi, a pro detekci byly použity elektrochemické detektory. V experimentální části je popsán průběh optimalizace metody a shrnuty výsledky. Metoda umožnila kvantitativně stanovit noradrenalin, DOPA, adrenalin, kyselinu homovanilovou, dopamin a serotonin. Separace analytů probíhala na koloně Phenomenex Gemini C18, s využitím izokratické eluce, kdy byla jako eluční činidlo použita směs fosfáto-acetátového pufru, acetonitrilu a methanolu v poměru 92,15:3:4,85 o pH 5,35. Separace probíhala při nastaveném průtoku 0,9 mL/min a teplotě kolony 45°C. Metoda poskytla pro jednotlivé analyty limity detekce v rozmezí od 0,112 μmol/L do 0,368 μmol/L a limity kvantifikace v rozmezí od 0,372 μmol/L do 1,220 μmol/L.

Abstract:

In this thesis a method for determination of monoamine hormones by reversed-phase liquid chromatography with electrochemical detection has been optimized and validated. In the theoretical part of this thesis an overview of available methods for determination of monoamines with focus on methods employing liquid chromatography on revesed-phases with electrochemical detection is summarized. In the experimental part we described the process of optimization and presented the obtained results. The optimised method allows for quantification of noradrenaline, DOPA, adrenaline, homovanillic acid, dopamine and serotonine. The separation of analytes was conducted on Phenomenex Gemini C18 collumn with isocratic elution. Composition of the mobile phase was tuned to phosphate/acetate buffer-acetonitrile-methanol (92.15:3:4.85) at pH 5.35. The separation was optimized at 45 °C with flow of 0.9 mL/min. The limit of detection was found to be in range of 0.112 to 0.368 μmol/L with the limit of quantification in range of 0.372 to 1.220 μmol/L for all tested analytes.

Keywords

RP-HPLC, elektrochemická detekce, hormony, neurotransmitery, katecholaminy, dopamin, adrenalin, L-DOPA, noradrenalin, serotonin, Parkinsonova nemoc

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 28. 5. 2014

Thesis defence

• Date of defence: 24. 6. 2014
• Supervisor: doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Chemistry / Chemistry