Analýza mutantů nádorového supresoru p53

Bc. Johana Plch

Master's thesis

Analysis of mutants of the tumor suppressor p53

Abstract:

Nádorový supresor p53 hraje klíčovou roli při udržování genomové stability. Je aktivován v reakci na stres, kdy se jeho hladina v buňce stabilizuje a funguje jako transkripční faktor mnoha cílových genů, které se podílejí např. na apoptóze (bax) nebo zástavě buněčného cyklu (p21). Somatické mutace genu TP53 se vyskytují u 50 % nádorů. Tato diplomová práce se zabývá studiem funkčních vlastností teplotně senzitivních mutací (ts) a mutací, které mají za následek předčasné zařazení terminačního kodonu. U ts mutantů byla analyzována míra teplotní senzitivity, tzn. míra transaktivace v přítomnosti responzivního elementu RGC (25 °C, 30 °C, 35 °C) a diskriminativní charakter vůči responzivním elementům p21 a bax. Dále pak byla analyzována schopnost amifostinu reaktivovat funkci ts mutantů p53. Výsledky provedených analýz potvrzují různorodý charakter ts mutantů jak v míře teplotní senzitivity a diskriminativního charakteru, tak i v reaktivaci prostřednictvím amifostinu. V přítomnosti amifostinu byla částečně obnovena transaktivace u 5/6 ts mutantů. U mutantů s předčasně zařazeným terminačním kodonem byla analyzována jejich exprese na úrovni proteinu a mRNA.

Abstract:

The tumor suppressor p53 plays a key role in maintaining genomic stability. It is activated in response to stress; its level in the cell is stabilized and it acts as a transcription factor for a number of target genes involved in apoptosis (bax) or cell cycle arrest (p21). Somatic mutations of the TP53 gene are found in 50% of tumors. This thesis deals with the functional properties of temperature-sensitive mutations (ts) and truncating mutations, which result in premature termination codon. The degree of temperature sensitivity of ts mutants was analyzed, ie. the degree of transactivation response element in the presence of RGC responsive element (25 ° C, 30 ° C, 35 ° C). The discriminative character against the responsive elements p21and bax was defined. The ability of amifostine to reactivate the function ts mutant was analyzed the 53. The results of the analysis show the heterogeneous character of ts mutants in temperature sensitivity and discriminative character, as well as the reactivation through amifostinu. In the presence of amifostine the transactivation in 5/6 ts mutants was partially restored. In the group of mutants with premature termination codon protein and mRNA levels were analyzed.

Keywords

TP53, p53, teplotně senzitivní mutant, nesmyslná mutace, posunová mutace, NMD, amifostin, temperature, sensitive mutant, nonsense mutation, frame-shift mutation, amifostine

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 6. 1. 2015

Thesis defence

• Date of defence: 4. 2. 2015
• Supervisor: prof. RNDr. Jana Šmardová, CSc.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Experimental Biology / Molecular Biology and Genetics