Studium vlivu ethylenového receptoru ETR1 na cytokininovou signální dráhu u rostlin.

Bc. Dominik Novák

Bachelor's thesis

Study of ethylene receptor ETR1 and its influence on cytokinin signalling pathway in plants.

Anotácia:

V teoretické části bakalářské práce jsou shrnuty dosavadní poznatky o dvoukomponentním a vícestupňovém přenosu signálu u prokaryot a eukaryot. Je popsán mechanismus cytokininové a ethylenové signální dráhy u Arabidopsis thaliana, ethylenový receptor ETR1 a jeho interakce s fosfotransferovými proteiny AHP1-AHP3. Experimentální část bakalářské práce byla zaměřena na získání proteinu přijímačové domény ethylenového receptoru ETR1 (ETR1RD) z Arabidopsis thaliana. Gen ETR1RD byl naklonován do expresních vektorů pETM60-Ub2 a pETM60-Ub3, čímž vznikly konstrukty kódující fúzní proteiny Ub2-His6-ETR1RD a Ub3-His6-ETR1RD. Fúzní proteiny byly exprimovány v bakteriálním systému E. coli. Nativní protein ETR1RD byl získán metalochelatační afinitní purifikací fúzního proteinu Ub3-His6-ETR1RD a jeho štěpením S-TEV proteázou. Nativní protein ETR1RD byl však získán v nehomogenní formě a také MS analýza intaktní molekulové hmotnosti ukázala o něco vyšší molekulovou hmotnost než je teoretická.

Abstract:

The theoretical part of the bachelor thesis reviews the current knowledge regarding the signal transduction via two-component system and multi-step phosphorelay in prokaryotes and eukaryotes. The mechanism of cytokinin and ethylene signalling pathways in Arabidopsis thaliana, ethylene receptor ETR1 and its interactions with phosphotransfer proteins AHP1-AHP3 are described. The experimental part of the thesis was aimed at obtaining a protein of the receiver domain of the ethylene receptor ETR1 (ETR1RD) from Arabidopsis thaliana. The gene ETR1RD was cloned into expression vectors pETM60-UB2 and pETM60-Ub3, creating constructs encoding the fusion proteins Ub2-His6-ETR1RD or Ub3-His6-ETR1RD. Fusion proteins were expressed in E. coli bacterial system. Native protein ETR1RD was obtained by S-TEV protease cleavage of the purified fusion protein Ub3-His6-ETR1RD. Obtained pure native protein ETR1RD wasn´t homogeneous, and MS analysis of intact molecular weight showed slightly higher molecular weight than the theoretical

Kľúčové slová

ETR1, ethylenový receptor, Arabidopsis thaliana, přijímačová doména, dvoukomponentní systém, ethylenová signální dráha, cytokininová signální dráha, ethylene receptor, receiver domain, two-component system, ethylene signaling pathway, cytokinin signaling pathway

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 18. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 18. 6. 2012
• Vedúci: Ing. Blanka Pekárová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Biochemistry / Biochemistry