Exprese isoalergenů Mal d 1 ve slupce a dužnině jablek u plodů získaných z obchodních řetězců v České republice

Bc. Tereza Zunová

Diplomová práce

Expression of Mal d 1 allergens in apple skin and flesh from fruits obtained from retail chains in the Czech Republic

Anotace:

Alergie na jablka je jednou z nejčastějších potravinových alergií. Hlavní alergen jablečných plodů Mal d 1 je genová rodina 31 lokusů, z nich každý kóduje jinou izoformu. Jednotlivé izoformy mají odlišnou mírů exprese ovlivněnou genetickými i environmentálními, biotickými a abiotickými faktory.V této diplomové práci byla studována exprese izoforem jablečných alergenů Mal d 1.01, Mal d 1.02, Mal d 1.06A a Mal d 1.06B. Byly hodnoceny rozdíly v expresi jednotlivých izoforem, vzhledem k odrůdě, pomologickému stavu plodů, jejich původu, způsobu balení a jakosti. Dále byly hodnoceny rozdíly mezi expresí alergenů ve slupce a dužnině. K vyhodnocení byla použita metoda stanovení relativní exprese genů, založená na qRT-PCR. Statistické zpracování výsledků bylo založeno na vyhodnocení hodnot ΔCq a ΔΔCq. Jako house keepingový gen byl použit gen pro aktin a jako referenční vzorek odrůda Golden Delicious z VŠÚO Holovousy s.r.o.Z výsledků diplomové práce vyplývá, že exprese izoforem jablečných alergenů Mal d 1.01 a Mal d 1.02 je majoritní ve srovnání s ostatními izoformami bez ohledu na odrůdu, zemi původu, podmínky pěstování, skladování a prodej plodů. Jako odrůdy s vysokou expresí alergenů byly vyhodnoceny Golden Delicious a Jonagold a naopak s nízkou expresí odrůda Modi. Bylo prokázáno, že slupka měla větší expresi alergenů než dužnina a také, že na jednotlivé vzorky měly významný vliv faktory, jakými je doba a způsob skladování, manipulace s plody, způsob balení, jakost nebo napadení patogeny, související s obrannými reakcemi plodů za nepříznivých podmínek. Tyto výsledky potvrzují platnost všech stanovených vědeckých hypotéz. Většina autorů ve svých výzkumech porovnává odrůdy vysoce alergenní s odrůdami málo alergenními nebo se zabývají rozdíly v expresi alergenů mezi slupkou a dužninou, případně podmínkami skladování. Vzhledem k tomu je tato práce inovativní v komplexním přístupu zhodnocení všech možných faktorů, jež vstupují do procesu prodeje konzumních plodů. Diplomová práce vznikla za podpory grantového projektu NAZV MZe ČR QJ1510354.

Abstract:

Apple allergy is one of the most common food allergies. The main allergen Mal d 1 is a complex gene family of 31 loci, each of which codes for a different isoallergen. Individual isoforms have different level of expression influenced by genetic and environmental, biotic and abiotic factors.In this diploma thesis the expression of isollergens Mal d 1.01, Mal d 1.02, Mal d 1.06A and Mal d 1.06B were studied. Differences in the expression of individual isoforms were evaluated, based on the variety, the pomology, the origin, packaging and quality. Furthermore, the differences between the expression of allergens in the skin and the pulp were evaluated.The method of evaluation the relative gene expression based on qRT-PCR. The statistical processing of the results was based on the evaluation of ΔCq and ΔΔCq values. The gene for actin was used as the housekeeping gene, and as a reference sample the Golden Delicious from VŠÚO Holovousy s.r.o. was used.The results of the diploma thesis show that the expression of isoallergens Mal d 1.01 and Mal d 1.02 is major compared to the other isoforms irrespective of variety, country of origin, conditions of cultivation, storage and sale of fruits. Highly expressed varieties of allergens have been evaluated by Golden Delicious and Jonagold and cultivar with low expression of the allergens was Modi. It has been shown that the skin has a higher allergenicity than the pulp, and that factors such as time and method of storage, fruit handling, packing, quality or pathogenesis associated with defensive reactions of the fruit under unfavourable conditions cause higher expression of allergens. This result confirm all hypotheses. Most authors compare cultivars with hight and low allergenicity, compare skin and flesh in expression of allergens, or compare allergenicity in different storage conditions. Because of this, this diploma thesis is innovative in a comprehensive approach to the assessment of all the possible factors that enter into the process of selling fruit drinks.The diploma thesis was created with the support of the grant project NAZV MZe ČR QJ1510354.

Klíčová slova

jabloň, Malus × domestica, izoalergeny, Mal d 1, exprese, qRT-PCR, obchodní řetězce

Keywords

apple tree, Malus × domestica, isoallergen, Mal d 1, expression, qRT-PCR, retail chains

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 11. 4. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. Dr. Ing. Pavel Vejl

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / obor:
Biotechnologie / Biotechnologie a šlechtění rostlin