Vplyv ivermektinu na bunky netopierov kultivované in vitro

Zuzana KRÁLIKOVÁ

Bakalářská práce

Ivermectin impact on bat cells cultured in vitro

Anotace:

Táto bakalárska práca sa zaoberala vplyvom ivermektinu na bunky netopierov in vitro. Pre získanie dát boli využité bunkové kultúry, a to pečeňové a obličkové bunky od druhu Nyctalus noctula a nervové bunky od druhu Myotis myotis. Negatívne vplyvy ivermektinu boli sledované pomocou merania nekrózy buniek, reaktívnych foriem kyslíku a expresie génov kódujúcich heat-shock proteíny. Bunky boli pasážované a následne vystavené koncentráciám ivermektinu 0,0005 nng/ml, 0,05 ng/ml, 5 ng/ml 500 ng/ml a v prípade nekrózy aj 50 000 ng/ml. Takto exponované bunkové kultúry boli pozorované v priebehu 2, 6, 24, 48 až 72 hodín. Nekróza bola vyhodnotená pomocou farbiva, ktoré zvyšuje fluorescenciu v reakcií na prítomnosť DNA uvoľnenej z nekrotických buniek s poškodenou bunkovou membránou. Pri najvyššej koncentrácií sa nekróza u pečeni pohybovala v priemere od 17 do 26 %, u obličiek to bolo 11 až 66 % a u nervov 17 až 46%. Tento rozsah predstavuje štatisticky vysoko významné zvýšenie (p < 0,01) úrovne nekrózy v porovnaní s neošetrenými kontrolnými bunkami. Tvorba reaktívnych foriem kyslíka bola taktiež vyhodnotená pomocou fluorescencie, kedy pridaný substrát po oxidácií reaktívnymi formami kyslíka vydáva silný fluorescenčný signál. Obecne je možné povedať, že ku žiadnym výrazným zmenám vo vzniku ROS nedošlo. Expresia génov kódujúcich HSP70, HSP90aa a HSP90ab bola zaznamenaná kvantitatívnym PCR testom. U obličiek a pečeni sa neukázali žiadne štatisticky významné rozdiely v expresií (p > 0,05). Naopak u nervov expresia rástla u všetkých troch typov HSP 24 a 48 hodín po ošetrení ivermektinom, no po 72 hodinách došlo ku ich významnej down-regulácií. Táto záverečná práca poukazuje na to, že ivermektin má negatívny vplyv prevažne na nervy netopierov a môže predstavovať významný ohrozujúci faktor hlavne pre jedince, ktoré sú oslabené inými faktormi.

Abstract:

This bachelor's thesis aimed at the effect of ivermectin on bat cells in vitro. Cell cultures derived from the liver and kidney of Nyctalus noctula and and the olfactory nerve of Myotis myotis were used. The negative effects of ivermectin were evaluated by the level of necrosis, reactive oxygen species production, and the expression of genes encoding heat-shock proteins. Cells were exposed to ivermectin concetrations of 0,0005 ng/ml, 0,05 ng/ml, 5 ng/ml, 500 ng/ml, and in the case of necrosis also 50 000 ng/ml for 2, 6, 24, 48, or 72 hours. Necrosis was assessed using a stain increasing fluorescence in response to the presence of DNA leaked through the damaged cellular membranes of necrotic cells, with the highest concetration causing necrosis raging between 17 and 26 % in liver cells, 11 and 66 % in kidney cells, and 17 and 46 % in nerves. This range represents statistically highly significant increase (p < 0,01) in the levels of necrosis compared to untreated control cells. The production of reactive oxygen species was measured as an increase in fluorescence following the oxidation of an externally added substrate by reactive oxygen species. Significant changes in the production of reactive oxygen species were observed only occasionally. Expression of genes encoding HSP70, HSP90aa and HSP90ab was determined by quantitative RT-PCR test. No statistically significant differences (p > 0,05) in expression in liver and kidney cells were observed. On the contrary, nerve cells showed the significant up-regulation of all tested types of HSP-coding gene expression after 24 and 48 hours, but after 72 hours the expression was significantly down-regulated. In conclusion, ivermectin can have negative effects mainly on the nerves of bats and may represent a significant threat to individuals that are weakened by other factors.

Klíčová slova

bunkové kultúry, cytotoxicita, oxidatívny stres, nekróza, heat-shock proteíny

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 31. 3. 2025

Zveřejnit od: 31. 12. 2999

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Monika Němcová, Ph.D.

Veterinární univerzita Brno

Fakulta veterinární hygieny a ekologie

Bakalářský studijní program / obor:
Ochrana zvířat a welfare / Ochrana zvířat a welfare