Izolace mikroorganismů produkujících depolymerizační enzymy

Martina Martinková

Bachelor's thesis

Isolation of Microorganisms Producing Depolymerase Enzymes

Abstract:

Byla provedena izolace a identifikace mikroorganismů produkujících depolymerizační enzymy vybraných polymerů. Zdrojem zmíněných mikroorganismů byly vzorky kompostů, které byly naočkovány na kultivační půdy obsahující polyestery polybutylen adipát/tereftalát (PBAT) nebo kyselinu polymléčnou (PLA) v podobě submikročástic. Celkem bylo zkoumáno 5 vzorků kompostu, které byly dále charakterizovány dostupnými fyzikálně ? chemickými vlastnostmi jako je pH, sušina a spalitelný podíl. Ze vzorků kompostů byla prováděna izolace bakterií schopných tvořit zóny hydrolyzovaného polymeru kolem svých kolonií, což bylo považováno za důkaz produkce extracelulárních depolymerizačních enzymů. V případě kultivační půdy s obsahem PLA nebyly zóny pozorovány, tudíž nebyla izolována žádná bakteriální kultura hydrolyzující PLA. Naopak v případě kultivační půdy s obsahem PBAT byly izolovány čtyři bakteriální kmeny, později identifikovány jako blízce příbuzné kmenům Actinomadura rubrobrunea DSM 43750, Thermobispora bispora DSM 43833 a Thermomonospora curvata DSM 43183. Pro identifikaci izolovaných bakterií byla použita metoda sekvenace genu 16S rRNA, byla izolována DNA mikroorganismu a po purifikaci vzorku byl tento odeslán k sekvenaci. Získaná sekvence nukleotidů DNA byla porovnána v databázi GenBank.

Abstract:

Isolation and identification of microorganisms producing depolymerizating enzymes of selected polymers was performed. The source of these microorganisms were samples of compost that were inoculated into culture medium containing polyesters, polybutyleneadipate-co-butyleneterephthalate (PBAT) or polylactic acid (PLA) in the form of submicroparticles. A total of five samples of compost were examined and further characterized by available physico-chemical properties such as pH, solids and combustible portion. Samples of compost were performed isolation of bacteria capable of forming zone hydrolysed po-lymer around their colonies, which were considered as evidence of the production of extracellular depolymerizating enzymes. In the case of culture medium containing PLA, the zones were not observed, therefore, no PLA hydrolysing bacterial culture has been isolated. On the contrary, in the case of culture medium containing PBAT, four bacterial strains were isolated, which were later identified as closely related strains of Thermomonospora curvata DSM 43183, Actinomadura rubrobrunea DSM 43750 and Thermobispora bispora DSM 43833. The method of sequencing the 16S rRNA gene was used for identification of the isolated bacteria, DNA of the microorganism was isolated and after the purification of the sample, it has been sent to sequencing. The resulting DNA nucleotide sequence was compared to the GenBank database.

Keywords

biodegradace, polybutylen adipát/tereftalát, kyselina polymléčná, biodegradace za termofilních podmínek, aktinomyceta

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 24. 5. 2013

Accessible from:: 24. 5. 2013

Thesis defence

• Supervisor: doc. Mgr. Marek Koutný, Ph.D.

Tomas Bata University in Zlín

Faculty of Technology

Bachelor programme / field:
Chemistry and Food Technologies / Technology and Economics of Fat, Cosmetics and Production Detergent