Produkce rekombinantních antigenů viru HIV za využití eukaryotických expresních systémů

Terézia KUROVÁ

Bakalářská práce

Production of recombinant antigen of HIV using eukaryotic expression systems

Anotace:

Tato bakalářská práce se zaměřuje na studium produkce rekombinantních antigenů viru lidské imunodeficience za využití eukaryotických expresních systémů. Teoretická část této práce se zabývá historií viru, jeho epidemiologií, terapií, možnou vakcinací, strukturou viru HIV, významem glykosylace obalového proteinu gp120, možnostmi produkce rekombinantních proteinů za využití savčích expresních systémů a jejich purifikaci za pomocí afinitních chromatografických metod. Nejčastěji používaným expresním systémem je buněčná linie HEK 293. Purifikace proteinů je prováděna nejčastěji za využití imobilizované kovově-afinitní chromatografie k purifikaci rekombinantních proteinů obsahujících krátkou afinitní značku, složenou ze zbytků polyhistidinu. Experimentální část bakalářské práce se věnuje optimalizaci kotransfekce eukaryotické buněčné linie HEK 293F pomocí plazmidu kódující sekretující se formu env.gp140.SOSIP proteinu a plazmidu kódujícího proteinázu furin v různých poměrech. Poté kotransfekci s plazmidem, který nese sekvenci pro tři env.gp140.SOSIP proteiny. Závěr experimentální části se věnuje chromatografické metodě sloužící k purifikaci proteinů.

Abstract:

This Bachelor's thesis is devoted to the study of production of recombinant antigens of human immunodeficiency virus using eukaryotic expression systems. The theoretical part of this Bachelor's thesis discusses history, epidemiology, treatment and the structure of HIV virus and possible vaccination. Further it deals with the significance of glycosylation of envelope glycoprotein GP120, the possibilities of production of recombinant proteins using mammalian expression systems and their purification using methods of affinity chromatography. The most frequently used expression system is the cell line HEK 293. The protein purification is most frequently performed by applying immobilized metal-affinity chromatography to purify recombinant proteins containing a short affinite tag which consists of polyhistidine residue. The practical part of this Bachelor's thesis deals with the optimization of cotransfection of eukaryotic cell lines HEK 293F by applying various proportions of plasmid which encodes secreted form of protein env.gp140.SOSIP and plasmid which encodes proteinase furin followed by cotransfection using plasmid which contains a sequence of three env.gp140.SOSIP proteins. In conclusion, the Bachelor's thesis discusses methods of chromatography used to protein purification.

Klíčová slova

HIV, glykosylace, transfekce, HEK 293F, rekombinantní proteiny

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 4. 5. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Michal Křupka, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární a buněčná biologie