Vztah mezi post-translačními modifikacemi a funkcí u proteinů Wnt dráhy

Bc. Miroslav Micka

Master's thesis

Connections between post-translational modifications and function in the Wnt pathway proteins

Anotácia:

Post-translační modifikace jsou v přírodě vhodným nástrojem regulace aktivity a funkce proteinů. Jednou z těchto post-translačních modifikací je fosforylace proteinů. V této diplomové práci se věnuji analýze fosforylace proteinu Dishevelled (DVL), který hraje klíčovou roli ve Wnt signální dráze, ale účastní se i jiných signalizací. Ve své diplomové práci validuji funkčnost a specificitu patnácti fosforylačně specifických protilátek proti proteinu DVL3, které mají potenciál poskytnout vhodný nástroj pro studium fosforylací tohoto proteinu. Dále v této diplomové práci osvětluji vliv jednotlivých kináz asociovaných s proteinem DVL na jeho subcelulární lokalizaci. U dvou z nich odhaluji klíčová aminokyselinová rezidua na proteinu DVL3, jejichž fosforylace je důležitá pro přechod do dané subcelulární lokalizace. V neposlední řadě jsem purifikoval dva fragmenty proteinu DVL3 jako základ pro strukturní studium a studium fosforylace tohoto proteinu in vitro.

Abstract:

Post-translational modifications are an efficient tool to regulate the activity and the function of various proteins in the nature. One of these post-translational modifications is protein phosphorylation. In this thesis, we study phosphorylation of protein Dishevelled (DVL), which plays a key role in the Wnt signalling pathway but also participates in other signalling pathways. In this diploma thesis, we validate fifteen phosphorylation specific antibodies against DVL3, which have a potential to provide a right tool to study phosphorylation of this protein. Furthermore, we unravel the effect of DVL-associated kinases on DVL3 subcellular localization. Key amino acid residues on DVL3 were identified for 2 of them. Their phosphorylation is important for reaching the effect of the kinases on DVL3 subcellular localization. Last but not least, we purified two DVL3 fragments for the structural analysis and for the analysis of phosphorylation of this protein in vitro.

Keywords

Post-translační modifikace, Fosforylace proteinů, Wnt, Dishevelled, Post-translational modifications, Protein phosphorylation

Jazyk práce: English

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 6. 2020

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 9. 7. 2020
• Vedúci: prof. Mgr. Vítězslav Bryja, Ph.D.
• Oponent: Mgr Jan Mašek, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Experimental Biology / Molecular Biology and Genetics