Vyšetření celiakie v souvislosti s osteoporózou

Romana SLADKÁ

Bachelor's thesis

The testing of celiac disease in connection with osteoporosis

Abstract:

Ve své bakalářské práci jsem se zabývala vyšetřením celiakie v souvislosti s osteoporózou. Cílem této práce bylo stanovení hladiny protilátek v séru proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA a IgG u pacientů s prokázanou osteoporózou. Na základě výsledků dané studie vyhodnotit možné souvislosti osteoporózy a celiakie. Dále porovnání výsledků s literárními údaji. V první části práce jsem se zaměřila na stávající poznatky o chorobách celiakie a osteoporózy. U celiakie jsem nastínila historii choroby, charakteristiku onemocnění. Také jsem se zaměřila na diagnostiku celiakie pomocí laboratorních sérologických testů ELISA. A na závěr jsem se zmínila o léčbě bezlepkovou dietou. U osteoporózy jsem popsala její historii, příznaky, formy, rizika a komplikace, které osteoporóza přináší. Metodickou část mé práce jsem prováděla v biochemicko-hematologické laboratoři Stafila, s. r. o. se sídlem v Českých Budějovicích, kde jsem zaměstnána. Měření jsem prováděla na úseku mikrobiologie, kde se také provádí imunologická vyšetření. Prováděla jsem screening celiakie ze séra a to stanovení protilátek proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA a IgG metodou ELISA sandwich. Měření jsem prováděla u 58 sér pacientů s diagnózou osteoporózy. Séra jsem získávala za pomoci mé vedoucí práce MUDr. Marie Ládové, která vede osteologickou ambulanci v Českých Budějovicích. Sérologické markery celiakie jsem stanovovala enzymoimuno analýzou na automatickém analyzátoru Nexgen Four od firmy Test-Line. V této části popisuji analyzátor Nexgen Four, jeho specifikaci, vlastní kontroly přístroje, kalibrace a kontroly stanovení. Dále popisuji princip metody ELISA sandwich. Jde o nekompetetivní enzymoimunoanalýzu. Na závěr této části jsem popsala metodický postup práce, přípravu pracovních roztoků a kontrol. Přípravu a ředění vzorků k analýze a pracovní postup pro vyhodnocení semikvantitativní indexem pozitivity a kvantitativní U/ml. Dále jsem pokračovala vlastním měřením. U všech kroků, které jsem během měření provedla jsem postupovala dle standardních operačních postupů laboratoře Stafila, s. r. o.. Výsledky mého měření jsem zpracovala ve třetí části této práce. Naměřené výsledky jsem zanesla do tabulky: kvantitativní vyjádření hladiny protilátek proti tTg IgA a IgG (U/ml) v sérech pacientů s prokázanou osteoporózou. Dále jsem vypracovala graf: procentuální vyjádření výsledků stanovení hladiny protilátek proti tTg IgA a IgG v séru u pacientů s prokázanou osteoporózou. Do výsledků jsem dále zařadila kalibrační grafy pro metody tkáňové transglutaminázy IgA a IgG a tabulky naměřených hodnot kontrol pro tyto metody. Z 58 zkoumaných vzorků osteoporotických pacientů byly 3 vzorky pozitivní, tedy měly hodnotu hladiny protilátek tTg IgA a IgG vyšší jak 22 U/ml. 1 vzorek měl hraniční hodnoty, to znamená, že měl protilátky proti tTg IgA a IgG v rozmezí 18 až 22 U/ml. Pozitivní výsledky jsem naměřila u pacientů narozených v roce 1976 a 1978. Hraniční výsledek měl pacient narozen v roce 1962. V grafu č. 1 jsem naměřené hodnoty protilátek proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA a IgG vyjádřila procentuálně. Z 58 měřených vzorků byly 3 vzorky pozitivní, což představuje 5% a 1 vzorek hraniční, což představuje 2%. Ve své analýze jsem vycházela z dostupnosti zkoumaného materiálu a možností naší laboratoře. Celiakie je onemocnění, kterému se v dřívější době nevěnovalo příliš pozornosti. Hypotéza o souvislosti osteoporózy s celiakií se potvrdila.

Abstract:

My Bachelor´s thesis deals with the examination of celiac disease in connection to osteoporosis. The aim of the thesis was to specify the level of antidotes against tissue transglutaminase in the class IgA and IgG in the serum with osteoporosis diagnosed patients, to interpret, based on the results of the study, possible link between osteoporosis and celiac disease as well as to compare the outcome with scientific data. I focused on the present knowledge of osteoporosis and celiac disease in the first part. As for celiac disease, I described its history and characteristics. I also paid attention to diagnostics of celiac disease with the assistance of laboratory serological tests ELISA. I mentioned the free-gluten diet treatment after that. As regards osteoporosis, I described its history, symptoms, forms, perils and complications which the disease causes. I conducted the methodical part of my work in the biochemical haematological laboratory Stafila where I work, with its seat in České Budějovice. As for measurements, I took them in the department of microbiology, where immunologic tests are also taken. I carried out the screening of celiac disease from serum, namely the determination of antidotes against tissue transglutaminase in the class IgA and IgG, with the aid of ELISA - a sandwich method. I took measurements with 58 osteoporosis diagnosed patients. I obtained the sera thanks to the supervisor of my thesis Mrs. Marie Ládová, who is at the head of an osteological outpatient department in České Budějovice. I stated the serological markers of celiac disease with the assistance of enzymatic immunoanalysis conducted on automatic analyzer Nexgen Four, which was provided by the firm Test-Line. I describe the analyzer, its specification, checking and calibration of the gadget together with determination checks in this part of the thesis. Additionally, there is described the principle of the method ELISA- sandwich, which is non-competitive enzymatic immunoanalysis. At the end of the section there is depicted the methodical procedure of my work, the preparation of working solutions and checks, the preparation and dilution of samples for analysis and working procedure for semiquantitative interpretation with positivity index and for quantitative interpretation U/ml. I continued with my own measurements. while respecting standard operations procedures of the laboratory Stafila, a limited liability company. The results of my measurements are processed in the third part of the thesis. The acquired results are given in a table: quantitative interpretation of the antidote against tTg IgA and IgG (U/ml) level in the sera of the osteoporosis diagnosed patients. Then I presented a graph interpreting the proportional relation of the antidote against tTg IgA and IgG levels in the sera of the osteoporosis diagnosed patients. There are included calibration graphs for tissue transglutaminase IgA and IgG and tables of the obtained data of checks for the methods in the results. 3 out of the 58 examined samples of osteoporotic patients were positive, they had the level of antibodies higher than 22 U/ml. One of the samples had marginal figures, which means it had the antidotes against tTg IgA an IgG between 18 and 22 U/ml. Positive results were found with patients born in 1976 and 1978. A patient born in 1962 appeared to have a marginal result. The acquired antidote figures against tissue transglutaminase in the class IgA and IgG are presented proportionally in the graph 1. 3 out of the 58 measured samples were positive, which represents 5%, and 1 sample was marginal, which is 2%. My analysis is based on the availability of the examined material and the potential of our laboratory. Celiac disease is an illness which was not paid much attention to in the past. Hypothesis about the link between osteoporosis and celiac disease has been proved.

Keywords

celiakie, osteoporóza, ELISA, sérologické markery, analyzátor, protilátka, tkáňová transglutamináza, laboratoř, onemocnění, hypotéza, kazuistika.

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2013

Accessible from:: 3. 5. 2013

Thesis defence

• Supervisor: MUDr. Marie Ládová

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Zdravotní laborant