Validace ELISA souprav na stanovení alergenů v potravinách

Mgr. Kateřina Mairychová

Master's thesis

The Validation of ELISA Kits for Food Allergens determination

Abstract:

Diplomová práce se zabývá problematikou potravinových alergií s důrazem na stanovení potravinových alergenů. V úvodní části jsou popsány jednotlivé potravinové alergeny a nastíněna problematika označování potravin obsahujících tyto látky. Významný je úsek týkající se vlastního analytického stanovení potravinových alergenů a procesů validace imunoanalytických metod. Základním požadavkem kladeným na experimentální část bylo prověření kvality komerčních souprav pro stanovení potravinových alergenů vyrobených firmou SEDIUM RD s.r.o.. K analýzám bylo vybráno 40 druhů potravin ? tzv. nulových matric. Obsah alergenů byl stanoven 5 různými soupravami uvedeného výrobce. Neočekávaná přítomnost potravinových alergenů byla zjištěna ve vzorcích kuřecího masa (vaječné alergeny), nesolených a nepražených arašídů (vaječné alergeny) a žitné mouky (alergeny hořčice). Na základě mých výsledků byly modifikovány extrakční postupy vedoucí k eliminaci nežádoucí cross-reaktivity (alergeny vajec v kuřecím masu). V ostatních případech se cross-reaktivitu nepodařilo eliminovat a moje výsledky posloužily jako podklad k charakteristice cross-reaktivity dané soupravy. Tyto informace jsou velice důležité pro uživatele a jsou uvedeny v návodu k použití soupravy. V rámci validačního procesu soupravy pro stanovení alergenů hořčice jsem provedla stanovení analytické citlivosti, opakovatelnost extrakce, test ředění, intra?assay a vybrané zátěžové testy.

Abstract:

The Thesis describes broad issue of food allergies emphasizing the analysis of food allergens. The initial part of the Theoretical section is devoted to the characterization of particular food allergens. There are also outlined questions of food labelling. The section detailing the analytical determination and the procedure of validation of immunoassays is an important part of the Theoretical section. The basic requirement lying to Experimental section was revision of quality of immuno?enzymatic kits for determination of food allergens which are produced by company SEDIUM RD s.r.o. Forty kinds of food were chosen to be analysed ? so called zero matrix. The content of allerens in particular matrix was analyzed by 5 different immuno ? enzymatic kits. Unexpected presencet of food allergen was discovered in samples of chicken meat (allergens of egg), non-salted and non-roasted peanuts (allergens of egg) and rye flour (allergens of mustard). On the basis of my outcomes the process of the extraction was modified to eliminate unadvisable cross?reaktivity (allergens of egg in the chicken meat). In other cases the cross?reactivity could not be eliminated and my outcomes answered for basis for characterization of this kits reactivity. This information is very important for the consumers and it is published in the kit manual. Within the scope of validation of immuno?enzymatic kit for quantitative determination of mustard in food I undertook the analysis of the analytical sensitivity, repeatability of extraction, test of dilution, intra?assay and chosen stress tests.

Keywords

potravinový alergen, ELISA, označování potravin, validace, nulové matrice

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 5. 5. 2010

Thesis defence

• Date of defence: 2. 6. 2010
• Supervisor: doc. MVDr. Jaroslava Mazurová, CSc.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Master programme / field:
Special Chemical and Biological Programmes / Analysis of Biological Materials