Vliv růstových faktorů na expresi genů v jaterních myofibroblastech potkanů

Bc. Eva Peterová

Diplomová práce

The effect of growth factors on gene expression in rat liver myofibroblasts

Anotace:

Jaterní tkáň je tvořena několika typy buněk. Při poranění jater dochází k fibrotizaci nekrotické tkáně, pomocí aktivovaných jaterních hvězdicovitých buněk (HSC) a portálních myofibroblastů. V této práci jsme sledovaly vliv kultivačního prostředí v kombinaci s růstovým faktorem FGF-1 na expresi určitých genů v jaterních myofibroblastech. V první fázi experimentu jsme se zaměřily na srovnání exprese genů v buňkách kultivovaných v dvojrozměrném (2D) prostředí na polystyrenových Petriho miskách s kultivací v trojrozměrném (3D) kolagenním gelu. V obou případech po dvanácti hodinové expozici růstovým faktorem FGF-1. V druhé fázi pokusu jsme se zaměřili na interakci FGF-1 s heparinem. Buňky jsme získali z frakce neparenchymových jaterních buněk potkanů pomocí opakovaného pasážování. Buňky jsme kultivovaly v kolagenním gelu a na plastu v kultivačním médiu s přídavkem růstového faktoru. Po kultivaci jsme z buněk izolovali celkovou RNA, která byla převedena pomocí reverzní transkriptázy na cDNA. Expresi genů jsme stanovili pomocí rtRT-PCR. Data jsme statisticky zpracovali pomocí Studentova t-testu. Z experimentu vyplynulo, že kultivační prostředí má zásadní vliv na kultivované myofibroblasty a že FGF-1 ovlivňuje expresi genů v jaterních myofibroblastech. Naše práce přinesla i poznatek, že exprese genů buněk kultivovaných s FGF-1 a buněk kultivovaných s FGF-1 a heparinem, se liší. Zaměřili jsme se na změny v expresi genů matrix metaloproteinázy 9, matrix metaloproteinázy 13 a osteopontinu

Abstract:

The liver tissue consists of several types of cells. Liver injury leads to fibrosis of the necrotic tissue induced by hepatic stellate cells (HSC) and portal myofibroblasts. We have studied the influence of the fibroblast growth factor FGF-1 on the expression of certain genes in hepatic myofibroblasts. In the first part of the experiment, we compared the gene expression in cells growing on polystyrene Petri dishes (2D culture) and in cells embedded in collagen gel(3D culture), after a 12-hour exposition to the growth factor FGF-1. In the second part, we studied the interaction between FGF-1 and heparin. The cells were isolated from the fraction of non-parenchymal liver cells of Sprague- Dawley rats by repeated passaging. After harvesting the cells total cellular RNA was isolated and translated into cDNA using the reverse transcriptase. We used rtRT-PCR to evaluate gene expression. We focused on the changes of gene expression of matrix metalloproteinase 9, matrix metalloproteinase 13 and osteopontin. The data was statistically analysed by Student´s t-test. The experiments showed that the cellular environment has crucial influence on hepatic myofibroblasts in vitro and that FGF-1 affects gene expression in these cells. The largest changes were found in the expression of matrix metaloproteinase 13.

Klíčová slova

jaterní myofibroblasty, exprese genů, jaterní fibróza

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 8. 5. 2011

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 1. 6. 2011
• Vedoucí: prof. RNDr. Zuzana Bílková, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Analýza biologických materiálů