Porovnání tří histologických metod vedoucích k určení diagnozy.

Lenka DOLEJŠÍ

Bachelor's thesis

Comparing of three histology methods leading to the diagnosis.

Abstract:

Cílem mé práce bylo porovnat tři histologické metody, jak na úrovni operačních postupů, tak i vzhledem k jejich podílu na určení výsledné diagnózy. Porovnávala jsem rychlou peroperační biopsii (RPB), barvení hematoxylin-eosin (HE) a imunohistochemické metody (IHC), konkrétně monoklonální protilátku Cytokeratin 7 (CK 7). Všechny tyto tři histologické metody se používají při vyšetření sentinelové uzliny (SN), která je odebrána pacientům s již diagnostikovaným karcinomem prsu. První část své práce jsem věnovala teorii, popisu jednotlivých dílčích kroků u vybraných histologických metod. Také jsem zde nastínila problematiku vyšetřování uzlin u karcinomu prsu, výhody, které pacientům poskytuje v současné době velmi hojně používané vyšetření SN oproti dříve prováděné disekci axilárních uzlin. Disekce axilárních uzlin je prováděna dále, ale ne již v takovém měřítku, jako tomu bylo dříve. Před zavedením metody vyšetření SN byly automaticky u každého prokázaného karcinomu prsu odebrány pacientovi axilární uzliny. Tento celkem rozsáhlý zákrok pacientům přinášel další komplikace ve formě špatné hybnosti končetiny, otoků atd. Tím byla zhoršena i následná rekonvalescence a léčba pacienta. V současnosti se přistupuje k odběru axilárních uzlin jen při nálezu metastázy v sentinelové uzlině. Jak z mé práce vyplývá, mnohem více je nalezeno sentinelových uzlin bez metastázy, a proto je mnoho pacientů disekce axilárních uzlin ušetřeno. To je způsobeno včasným záchytem karcinomu. Metodickou část mé práce jsem prováděla v patologické laboratoři Nemocnice České Budějovice a.s. (PAO NCB), kde jsem zaměstnána. Tato část je rozdělena na preanalytickou, analytickou a postanalytickou fázi. V preanalytické fázi zdůrazňuji, jak důležitý je správný odběr a transport vzorku do laboratoře. V analytické fázi se věnuji jednotlivým metodám samostatně. Představuji zde kroky, kterými musí každý vyšetřovaný vzorek projít, než je možné z něho provést diagnózu. Postanalytická fáze shrnuje samotnou diagnostiku. V části výsledky jsem nejprve provedla statistické zhodnocení celkového počtu vyšetřených parafínových bloků a preparátů za období 2003 2013. Je zde také zachycen každoroční nárůst IHC, od vlastního zavedení metody IHC v roce 1998 až do roku 2013. Zmapovala jsem i postupnou změnu panelu primárních protilátek používaných na PAO NCB. A dále zhodnotila vlastní naměřené výsledky. Celkem jsem za období březen 2013 březen 2014 zpracovala 142 SN, které byly odebrány k již prokázanému karcinomu prsu. Každá SN byla zpracována RPB, následně barvena HE a dovyšetřena pomocí IHC protilátkou CK 7. Rychlou peroperační biopsií bylo v SN nalezeno 22 metastáz karcinomu prsu, jejich dalším zpracováním a barvením HE bylo nalezeno dalších 16 pozitivních SN (celkem tedy již 38 pozitivních SN) a pomocí IHC protilátkou CK 7 ještě dalších 7 pozitivních SN. Dohromady jsme nalezly metastázu v 45 sentinelových uzlinách. 97 sentinelových uzlin bylo negativních. Z dosažených výsledků vyplývá, že největší záchyt metastáz v SN bylo pomocí IHC protilátkou CK 7.Také jsem se zabývala možností vlivu věku pacienta na přítomnosti metastázy v SN. Pacienty s vyšetřovanou SN jsem rozdělila do 5 věkových kategorií (graf 5, 6). Nejvíce nalezených pozitivních SN bylo ve věkové kategorii 61-70 let. V diskuzi jsem kromě hodnocení naměřených výsledků popsala výrazné změny, hlavně ve formě automatizace, kterými si RPB, HE a IHC prošly během posledních let na oddělení PAO NCB.

Abstract:

The main aim of this thesis was to compare three methods of histology from both the theoretical analysis to determine the final diagnosis and resulting the level of surgical procedures. I compared the rapid intraoperative biopsy (RPB), dyeing of hematoxylineosin (HE) and immunostaining method (IHC) especailly monoclonal antibody Cytokeratin 7 (CK 7). All of the three methods of histology are being used to examine the sentinel lymph node (SN). The SN is removed to the patients with diagnosed breast cancer. I paid attention to describe individual procedures of the selected methods of histology in the first part of this thesis. I also pointed out the complications during detecting the nodes of the carcinom of breast. And I underlined the advantages of detecting SN, which is nowadays widely supplied to all patients compare to the method of axillary nodes dissection used before. Before the SN detecting method was implemented, there used to be an old method which primarily removed the axillary nodes from each patient after the carcinom of breast had been detected. This quite extensive action caused further complications regarding the deconditioning of the limbs dynamics and swelling. With this respect the patient´s following treatment and recovery went worse. Currently the axillary nodes are being removed only if metastasis in sentinel lymph node was detected. My thesis shows that there were found many more sentinel nodes without metastasis and therefore, these days, there are many patients saved from the dissection of axillary nodes. This is mainly assured by an early detection of carcinoma. The methodical part of my thesis was carried out in the hospital of České Budějovice in the pathological lab (PAO NCB), where I have been employed. This part is divided into pre-analytic, analytic and post-analytic phases. The pre-analytical phase emphasizes the importance of correct biopsy and trasport of its sample to the lab. The analytical phase pays attention to each method individually. I describe all the procedures which each sample must go through before a diagnosis can be done. The post analytical phase summarizes the diagnose itself. In the part of the thesis which is aimed at results, I show statistical evaluations of the whole amount of examined paraffine embedded tissues and sample forms within the period of 2003 2013. There is also intercepted annual grow of IHC since its implementation in 1998 until 2013. I analysed a continual change of primary antibodies used at PAO NCB. I also evaluated my own measured results. In the term from March 2013 to March 2014 I processed altogehter 142 SN, which were removed from proved breast cancer. Each SN was processed through RPB, followed by dyeing through HE and examined with IHC antibody CK 7. There were found 22 metastasis of breast cancer in SN through the rapid intraoperative biopsy, other 16 metastasis were detected through HE staining and another 7 positive results in SN were detected through IHC antibody CK 7. We found altogether 45 positive metastasis in SN. 97 sentinel lymph nodes were negative. According to the processed results we proved that the biggest detection of metastasis in SN was through the method of IHC antibody CK 7. I also analysed the impact of patients´ age regarding the metastasis in SN. I divided the patients into 5 categories according to the age (see graph 5, 6). The largest number of SN positive was in the category 61-70 years of age. In the discussion part I described the evaluation of measured results and pointed out strong changes of RPB, HE and IHC methods which have been processed in the PAO NCB department within the past few years.

Keywords

rychlá peroperační biopsie, barvení hematoxylin-eosin, imunohistochemické metody, sentinelová uzlina, disekce axilárních uzlin

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 5. 5. 2014

Accessible from:: 5. 5. 2014

Thesis defence

• Supervisor: MUDr. Pavla Vítková

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Zdravotní laborant