Heterologní exprese rekombinantních proteinů v E. Coli

Klára HOLIBKOVÁ

Bakalářská práce

Heterologous expression of recombinant proteins in E. Coli

Anotace:

SH2 a SH3 domény se vyskytují v zadní části Src-kinázy mimo aktivní místo, kde jsou ustáleny na nečinnou enzymovou konformaci. Proteiny, které obsahují SH2 nebo SH3 ligandy, se mohou vázat na SH2 nebo SH3 domény Src-kinázy a přitahují je na konkrétní buněčná místa. Na+/K+-ATPasa (sodno-draselná pumpa) patří k jednomu z nejvýznamnějších enzymů v živočišném metabolismu. Hraje důležitou roli při vytváření klidového membránového potenciálu a vytváří gradient Na+ a K+, který následně využívají další enzymy k přenosu jiných látek přes cytoplasmatickou membránu. Cílem této bakalářské práce bylo provést expresi rekombinantních proteinů v E. Coli. Exprese proteinů je metoda, která umožňuje získat požadovaný protein ve velmi vysoké čistotě, což je potřeba zejména při strukturálních a interakčních studiích. Exprimované proteiny, které byly pro tuto práci vybrány, jsou SH2, SH3 a SH2SH3 homologní domény Src-kinázy a dále také cytoplazmatické segmenty ?-podjednotky Na+/K+ATPasy označované jako C23 a C45 klička.

Abstract:

SH2 and SH3 domains can be found in the rear part of Src-kinase outside the active site, where they are stabilized at inactive enzyme conformation. Proteins that contain SH2 or SH3 ligands may bind to SH2 or SH3 domain of Src-kinase and attract them to specific cellular locations. Na+/K+-ATPase (sodium-potassium pump) is one of the most important enzymes in animal metabolism. It plays an important role in the formation of resting membrane potential and creates gradient of Na+ and K+, which is then used by other enzymes for transfer of other substances through the cytoplasmatic membrane. The aim of this work was expression of recombinant proteins in E. Coli. Protein expression is a method that allows to obtain the desired protein in very high purity which is especially needed in structural and interaction studies. The expressed proteins, which were chosen for this work, are the SH2, SH3 and SH2SH3 homology domain of Src-kinase and also cytoplasmatic segments of Na+/K+-ATPase ?-subunit known as C23 and C45 loop.

Klíčová slova

E. Coli, vektor, SH2 doména, SH3 doména, Na+/K+-ATPasa, C45, C23

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 13. 5. 2013

Zveřejnit od: 13. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 4. 6. 2013
• Vedoucí: RNDr. Marika Havlíková, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Fyzika / Fyzika - Biologie