Vliv mrazení na enzymatickou aktivitu

Bc. Martina Klašková

Master's thesis

The Effect of Freezing on the Enzymatic Activity

Anotácia:

Tato diplomová práce se zabývá vlivem mrazení na aktivitu enzymů ve vodném roztoku. Jako modelový enzym byl použit enzym halogenalkandehalogenasa DbjA. Vliv zmrazení a rozmrazení na aktivitu enzymu DbjA byl studován bez přítomnosti kryoprotektivních látek. Enzym DbjA byl rychle mrazen v kapalném dusíku na 77 K a pomalu ve směsi suchého ledu a etanolu na 233 K a 253 K. Aktivita enzymu po zmrazení byla korelována se strukturními změnami enzymu. Enzym DbjA byl mrazen s draselno-fosfátovým a sodno-fosfátovým pufrem o koncentraci 0,1 mM a 50 mM. Lokální změny pH při zmrazení způsobené přítomností jednotlivých pufrů byly korelovány se změnami aktivit enzymu po jeho rozmrazení.

Abstract:

The topic if this master’s thesis concerns the effects of the freezing on enzymatic activity in aqueous solution. The haloalkane dehalogenase DbjA was used as a model enzyme. Effects of freezing - thawing on the activity of enzyme DbjA was experimentally studied in the absence of cryoprotective substances under various experimental conditions: rates and buffers. DbjA enzyme was rapidly frozen in liquid nitrogen at 77 K and slowly frozen in the mixture of dry ice with ethanol at 233 K and 253 K. The enzyme activity after freezing was correlated with structural changes of the enzyme. DbjA enzyme was frozen with potassium phosphate and sodium phosphate buffer at a concentration of 0.1 mM and 50 mM. The effects of buffers on enzymatic activity and the results of activity were correlated with apparent changes of pH during freezing.

Kľúčové slová

rychlost zmrazení, rozmrazení, halogenalkandehalogenasa, denaturace proteinu, aktivita enzymu, spektroskopie cirkulárního dichroismu, stabilita enzymu

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 1. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 13. 6. 2013
• Vedúci: doc. Mgr. Dominik Heger, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / odbor:
Chemistry / Organic Chemistry