Molekulární a fenotypová charakterizace vybraných HvMPK3 knockdown a HvMPK3 nadprodukčních transgenních linií ječmene

Jiřina HAVRÁNKOVÁ

Bakalářská práce

Molecular and phenotypic characterization of selected HvMPK3 knockdown and HvMPK3 overexpression transgenic barley lines

Anotace:

V první části bakalářské práce byla pomocí PCR genotypování ověřena celistvost T-DNA inzertů u potomstva T1 a T2 generace transgenních linií ječmene setého (Hordeum vulgare) s umlčenou expresí genu HvMPK3. Obdobně byla potvrzena celistvost T-DNA inzertů u T2 generace potomstva transgenních linií ječmene s nadprodukcí HvMPK3. Pomocí Multiplex TaqMan qPCR analýzy byly identifikovány v T1 a T2 generaci potomků rostliny potenciálně homozygotní v T-DNA inzerci. Spolehlivost predikce genotypu pomocí této metody byla potvrzena na základě uniformity potomstev vybraných homozygotních rostlin v rezistenci vůči hygromycinu. Rostliny s umlčeným HvMPK3 vykazovaly přibližně třikrát menší relativní množství mRNA HvMPK3 než kontrolní rostliny. Dílčím výstupem práce je ověření spolehlivosti rychlé a jednoduché metody identifikace transgenních rostlin ječmene pomocí in vitro testu hygromycinové rezistence. V druhé části práce nebyly pozorovány rozdíly v dynamice ztráty vody u transgenních a kontrolních rostlin ani výrazné rozdíly v dynamice vadnutí transgenních a kontrolních rostlin v průběhu působení sucha.

Abstract:

In the first part of the thesis, the presence of complete T-DNA insertions was confirmed by PCR in T1 and T2 generation progenies of transgenic barley plants with silenced HvMPK3. Similarly, complete T-DNA insertions were present in T2 generation progenies of transgenic barley lines overexpressing HvMPK3. Plants potentially homozygous for T-DNA insertion were identified among T1 and T2 progenies using Multiplex TaqMan qPCR. The reliability of this method for the genotype prediction was confirmed by the uniformity of progenies of selected homozygous plants in hygromycine resistance. The relative expression of HvMPK3 was approximately three times reduced in plants harboring silenced HvMPK3 gene as compared to control plants. One of the outputs of the thesis is the validation of the fast and simple identification of transgenic barley plants by means of in vitro hygromycine resistance assay. In the second part of the thesis, no differences were observed between transgenic and control plants in the water lost dynamics as well as in wilting dynamics during exposition to drought stress.

Klíčová slova

vodní stres, MAPK, ječmen setý (Hordeum vulgare), transgenóze, umlčená exprese, nadexprese

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 11. 5. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 5. 6. 2018
• Vedoucí: Ing. Pavel Křenek, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biotechnologie a genové inženýrství