Knock-out A3 adenosinového receptoru v nádorové linii za použití CRISPR/Cas9 systému

Kateřina FIALOVÁ

Bachelor's thesis

Knock-out of A3 adenosine receptor in cancer cell line with CRISPR/Cas9 technology

Abstract:

Předložená bakalářská práce je zaměřena na knock-out A3 adenosinového receptoru v nádorové linii MIA PaCa-2. Teoretická část bakalářské práce pojednává o adenosinu a adenosinových receptorech (A1, A2A, A2B a A3), které jsou spřaženy s G-proteinem. Popisuje jejich expresi a v práci se zaměřovalo na jejich roli u nádorových onemocnění. Dále je popsán mechanismus technologie CRISPR/Cas9 a její využití v onkologických terapiích. Experimentální část práce je zaměřena na knock-out A3 adenosinového receptoru. Přičemž musely být nejprve optimalizovány podmínky elektroporace, které byly následně využity pro samotný knock-out genu ADORA3 pomocí čtyř různých CRISPR RNA. Dle výsledků získaných z kvantitativní polymerázové řetězové reakce s reverzní transkripcí bylo zjištěno, že exprese genu byla po transfekci snížena a limitním ředěním byly následně vyselektovány klony, u kterých byla opět ověřena exprese genu. Klon, u kterého byl knock-out úspěšně proveden, může být v budoucnosti použit jako buněčný model pro testování nových potenciálních protinádorových léčiv, které budou cílit na A3 adenosinový receptor.

Abstract:

The aim of this bachelor thesis is knock-out of A3 adenosine receptor in MIA PaCa-2 cancer cell line. The theoretical part is about adenosine and its receptors (A1, A2A, A2B and A3) which are a part of a group of G-protein coupled receptors. This thesis describes the expression of these receptors focused on their role in cancer diseases. Furthermore, it describes the CRISPR/Cas9 technology and its use in oncological therapies. The experimental part is focused on the knock-out of the A3 adenosine receptor. Whereas the optimization of electroporation conditions had to be made, and these conditions were subsequently used for a knock-out of the A3 adenosine receptor by four types of CRISPR RNA. According to the results obtained from Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, it was found that the gene expression was reduced after transfection, and the clones were subsequently selected by limiting dilution, in which gene expression was verified. The clone in which the knock-out was successfully made can be used as a cell model for testing new potential antitumor drugs that will target the A3 adenosine receptor.

Keywords

Adenosin, adenosinové receptory, A3 adenosinový receptor, CRISPR/Cas9 systém

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2024

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Kateřina Ječmeňová

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Molecular and Cell Biology / Molecular and Cell Biology