Optimalizace in-vitro kultivačních postupů pro rotaviry prasat.

Bc. Robert König

Diplomová práce

Optimization of porcine rotavirus in-vitro cultivation methods

Anotace:

Tato diplomová práce se zabývá optimalizací kultivačních postupů pro rotaviry prasat v laboratorních podmínkách. Hlavním cílem bylo přizpůsobit postupy kultivace specifickým podmínkám vyžadovaným kmeny rotavirů skupiny A, které představují nejčastější příčinu průjmových onemocnění u selat a dosáhnout adaptace běžně se vyskytujících prasečích rotavirových kmenů na buněčné linie. Kmeny RVA izolované z terénních vzorků byly v šesti pasážích kultivovány na dvou buněčných liniích. Z jednotlivých pasáží byly extrahovány vzorky rotavirové RNA pomocí metody kolonek s křemíkovou membránou. Získaná RNA byla kvantifikována pomocí metody RT-qPCR. Stejně byly hodnoceny také výsledky kultivace adaptovaného kmene OSU za využití různých kultivačních postupů. Srovnání metod infekce buněčné linie MA104 rotavirovým kmenem OSU neurčilo žádnou z použitých metod jako více či méně vhodnou. Zatímco na buněčné linii MA104 nedocházelo k pomnožování žádného z kultivovaných virů, na buněčné linii Caco-2 se podařilo získat 13 kmenů schopných replikace.

Abstract:

This thesis focuses on optimizing cultivation procedures for porcine rotaviruses under laboratory conditions. The primary objective was to adapt cultivation methods to the specific requirements of group A rotavirus strains, which are the leading cause of diarrheal diseases in piglets, and to achieve the adaptation of common porcine rotavirus strains to cell lines. Group A rotavirus strains isolated from field samples were cultured over six passages on two cell lines. Viral RNA was extracted from each passage using silica membrane column method and quantified via RT-qPCR. Testing of various infection methods using an adapted rotavirus A strain OSU was evaluated identically. Comparisons of infection methods on the MA104 cell line using the OSU strain did not identify any method as particularly advantageous. While no viral replication was observed in the MA104 cell line, 13 replicating strains were successfully obtained in the Caco-2 cell line.

Klíčová slova

prasečí rotavirus, in vitro kultivace, adaptace, MA104, Caco-2

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 3. 1. 2025

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 10. 2. 2025
• Vedoucí: RNDr. Jana Prodělalová, Ph.D.
• Oponent: MVDr. Lucie Dufková, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Experimentální biologie živočichů a imunologie / Imunologie