Stanovení RHD genotypu plodu u RhD negativních těhotných žen

MUDr. Tereza KRATOCHVÍLOVÁ

Doctoral thesis

Assessment of fetal RHD genotype in Rh negative women

Abstract:

Úvod: V České republice se stanovuje na začátku těhotenství RhD krevní skupina, cílem screeningu je diagnostikovat RhD negativní těhotné ženy, které mohou být ohroženy rozvojem RhD aloimunizace, to nastává pouze v případě, že plod je RhD pozitivní. V současné době se prevence RhD aloimunizace provádí bez ohledu na znalost RHD statutu plodu. Již na začátku těhotenství je možné stanovit RHD genotyp plodu neinvazivně z volné fetální DNA cirkulující v mateřské periferní krvi. Problematika screeningového vyšetření RHD genotypu plodu je celosvětově řešena. V některých evropských zemích je vyšetření již rutinně zavedeno a přispívá tak k optimalizaci prenatální péče o RhD negativní těhotné, aplikace imunoglobulinu je cílená pouze u těhotenství s RhD pozitivním plodem. Cílem práce bylo zhodnotit klinickou a laboratorní efektivitu screeningu RHD genotypu plodu u RhD negativních žen. Materi l a metodika: V letech 2011?2015 ve Fakultní nemocnici Olomouc ve spolupráci Porodnicko-gynekologické kliniky, Ústavu lékařské genetiky a Transfúzního oddělení bylo provedeno 337 vyšetření RHD genotypu plodu u těhotných žen v I. a II. trimestru. Stanovení RHD genotypu plodu bylo hodnoceno paralelně pomocí dvou metodik QF-PCR a TaqMan Real Time PCR. Výsledek byl poté ověřen na RHD genotypu novorozence. Výsledky: Obě metody vykazovaly vynikající přesnost ve stanovení RHD genotypu. TaqMan Real Time PCR byla senzitivita testu 97,8 %, specificita 98,7 %. QF PCR byla senzitivita testu 98,9 % a specificita 98,7 %. Obě metodiky vyšetření RHD genotypu jsou spolehlivé a využitelné v klinické praxi. Z věr: Při hodnocení efektivity zavedení neinvazivního screeningu RHD genotypu plodu u RhD negativních žen je nutné současně hodnotit hledisko medicínské, organizační i ekonomické. Důslednější provádění prevence RhD aloimunizace ve skutečně indikovaných případech může vést ke snížení incidence RhD aloimunizace. Z medicínského hlediska je stanovení RHD genotypu plodu u všech RhD negativních žen na začátku těhotenství jednoznačně efektivní. Umožní diagnostikovat cca 40 % RhD negativních plodů kdy ženě není třeba podat IgG anti-D. Stanovení RHD genotypu plodu pomocí metodik TaqMan Real-time PCR a QF PCR genotypu plodu je využitelné v klinické praxi.

Abstract:

Objective: In the Czech Republic in all women within a first trimester screening a laboratory testing for RhD blood group from the peripheral blood should be performed. The aim of the screening is to diagnose RhD negative pregnant women, who may be at risk of developing RhD alloimmunization if the fetus is RhD positive. Currently, the prevention of RhD alloimmunization is carried out regardless of the knowledge of RHD fetal status. Already at the beginning of pregnancy it is possible to determine the RHD genotype of the fetus non-invasively due to cell free fetal DNA circulating in maternal peripheral blood detection. The issue of screening examination of fetal RHD genotype is solved worldwide. In some European countries, the examination is routinely established and thus contributes to the optimization of prenatal care for RhD negative pregnant women, immunoglobulin administration is targeted only in pregnancies with RhD positive fetus. The aim of our study is to evaluate clinical and laboratory effectiveness of fetal RHD genotype screening in RhD negative women by TaqMan Real-time PCR and QF PCR methods. Material and methods: In 2011?2015 at the University Hospital Olomouc 337 examinations of RHD fetal genotype were performed in pregnant women in first and second trimester. Determination of fetal RHD genotype was evaluated in parallel using two methods QF-PCR and TaqMan Real Time PCR. The result was then verified on a newborn RHD genotype. Results: Both methods showed excellent accuracy in determining the RHD genotype. TaqMan Real Time PCR had an assay sensitivity of 97.8% and a specificity of 98.7%. QF PCR had an assay sensitivity of 98.9% and a specificity of 98.7%. Both methods of RHD genotype examination are reliable and usable in clinical practice. Conclusion: When assessing the effectiveness of the introduction of non-invasive fetal RHD genotype screening in RhD negative women, it is necessary to assess the medical, organizational and economic aspects. More consistent prevention of RhD alloimmunization in the cases actually indicated may reduce the incidence of RhD alloimmunization. From the medical point of view the RHD genotype determination in all RhD negative women at the beginning of pregnancy seems effective. It allows to diagnose about 40% of pregnancies with RhD negative fetuses that do not require administration of IgG anti-D. IgG anti-D should be administered only in indicated cases. Determination of fetal RHD genotype by using TaqMan Real-time PCR is useful in clinical practice.

Keywords

Těhotenství, RhD negativní žena, volná fetální DNA, TaqMan Real-time polymerázová řetězová reakce, RHD genotyp plodu, prevence RhD aloimunizace, imunglobulin (Ig) G anti-D

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 15. 5. 2020

Thesis defence

• Supervisor: prof. MUDr. Marek Ľubušký, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Medicine and Dentistry

Doctoral programme / field:
Gynaecology and Obstetrics / Gynaecology and Obstetrics