Signální dráhy serotoninových receptorů v modulaci oxidativního vzplanutí fagocytů

Bc. Michal Rájecký, Ph.D.

Diplomová práce

Signalling pathways of serotonin receptors in modulation of oxidative burst of phagocytes

Anotace:

Tato práce se ve své první části zabývá detekcí serotoninových receptorů ze skupiny 5 HT2 na povrchu makrofágů. Protože dosud publikovaná data o expresi serotoninových receptorů nejsou jednotná ve svých závěrech, pokusili jsme se prokázat expresi těchto proteinů prostřednictvím protilátek. Žádná z protilátek proti 5 HT2A, 5 HT2B, ani 5 HT2C neprokázala přítomnost příslušného receptoru, ať už z důvodu nepřítomnosti receptoru na povrchu buněk, nebo nedostatečné specifity protilátek. Druhá část práce se zabývá zaváděním metody detekce transamidace se zaměřením na serotonylaci a její optimalizací. Prostřednictvím protilátky proti serotoninu a streptavidin-HRP v kombinaci s biotinylovaným substrátem byly detekovány serotonylované a transamidované proteiny v lyzátu. Detekce serotonylace v buněčné kultuře nebylo dosud v uspokojivé míře dosaženo, ať už z důvodu nedostatečné inhibice katalyzujícího enzymu transglutaminasy 2 na konci pokusu, nebo z důvodu přítomnosti serotonylovaných proteinů v buňkách před začátkem pokusu.

Abstract:

The first part of this thesis concerns on the detection of serotonin receptors of the 5 HT2 group on the surface of macrophages. Since the published results of expression of serotonin receptors are not consistent, we aimed to prove the expression of 5 HT2 receptors by antibodies. None of the antibodies against 5 HT2A, 5 HT2B, and 5 HT2C did prove any of these receptors on the surface of macrophages. The reason could be the non-presence of receptors on the surface of macrophages, or inadequate specifity of tested antibodies. The second part of this thesis concentrates on an introduction of the method for detection of serotonylation, and on optimization of this method. Detection of serotonylated proteins in cell lysate was done using antibody against 5 HT, while detection of transamidated proteins was performed using biotinylated substrate and streptavidin-HRP. Serotonylation in cell culture was not satisfactory optimized either because of insufficient termination of transamidation reaction in cells, or because of the presence of serotonylated proteins in cells before the experiment was performed.

Klíčová slova

5-HT2 receptor, serotonin, makrofágy, transglutaminasa 2, serotonylace, transamidace, macrophages, transglutaminase 2, serotonylation, transamidation

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 10. 5. 2011

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 7. 6. 2011
• Vedoucí: RNDr. Milan Číž, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Analytická biochemie