Stanovení intracelulárních hladin imatinibu v leukocytech u pacientů s chronickou myeloidní leukemií

Helena REZKOVÁ

Bachelor's thesis

Determination of imatinib intracellular levels in leukocytes of patients with chronic myeloid leukemia

Abstract:

Chronická myeloidní leukemie je maligní myeloproliferativní onemocnění charakteristické přítomností Filadelfského chromosomu, který vzniká v důsledku reciproké translokace chromosomů 9 a 22. Dochází tak k vzniku fúzního onkogenu BCR-ABL, který produkuje konstitutivně aktivní tyrosinkinasu Bcr-Abl. Cílená inhibice tohoto proteinu je dnes standardní terapií chronické myeloidní leukemie. Jedním z tyrosinkinasových inhibitorů je imatinib, jehož plasmatické hladiny jsou monitorovány. Byla prokázána souvislost mezi plasmatickými hladinami imatinibu a mírou léčebné odpovědi. Hladiny imatinibu v leukocytech by mohly mít vyšší klinickou relevanci než plasmatické, a to z důvodu jeho intracelulárního mechanismu účinku. Cílem této práce bylo optimalizovat rychlou a šetrnou izolaci leukocytů z plné krve a vyvinout metodu pro stanovení intracelulárního obsahu imatinibu. Analýza byla provedena pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií. Tyto postupy byly aplikovány na leukocyty izolované z plné krve pacientů s chronickou myeloidní leukemií. Byla sledována souvislost mezi stanovenými intracelulárními hladinami imatinibu, plasmatickými hladinami imatinibu, krevním obrazem leukocytů a časem od podání poslední dávky léku. Mezi sledovanými pacienty byla zaznamenána výrazná interindividuální variabilita.

Abstract:

Chronic myeloid leukemia is a malignant myeloproliferative disorder, characterized by the presence of the Philadelphia chromosome, which is a consequence of reciprocal translocation of chromosomes 9 and 22. This translocation leads to the formation of fusion oncogene BCR-ABL, which produces a constitutively active tyrosine kinase Bcr-Abl. Targeted inhibition of this protein is a current standard therapy for this disease. One of these tyrosine kinase inhibitors which plasma levels are monitored is also imatinib. The correlation between imatinib plasma levels and clinical response rate was proved. The levels of imatinib in leukocytes could be more clinically relevant than the plasma levels because of its intracellular mechanism of action. The aim of this thesis was to optimize rapid and gentle isolation of leukocytes from whole blood and to develop a method for the determination of intracellular content of imatinib. The analysis was performed by high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry. These procedures were applied on the leukocytes isolated from whole blood of patients with chronic myeloid leukemia. There was observed a relationship between the determined intracellular levels of imatinib, imatinib plasma levels, white blood cell count and the time since the last dose of the drug. A significant interindividual variability among the monitorized pacients was observed.

Keywords

Chronická myeloidní leukemie, imatinib, leukocyt, Filadelfský chromosom, Bcr-Abl, tyrosinkinasový inhibitor, terapeutické monitorování léčiv, kapalinová chromatografie, hmotnostní spektrometrie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 25. 4. 2013

Accessible from:: 25. 4. 2013

Thesis defence

• Date of defence: 27. 5. 2013
• Supervisor: Mgr. Kateřina Mičová

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology