Nové protein-proteinové interakce u vícekomponentního systému Arabidopsis thaliana

Bc. Zuzana Hanzelková

Diplomová práce

New protein-protein interactions in multistep phosphorelay system of Arabidopsis thaliana

Anotace:

Cytokininy jsou rostlinné hormony, které hrají velice důležitou roli v rostlinném vývoji a růstu. Přenos cytokininového signálu je zprostředkován tzv. vícekomponentním systémem pocházejícím z bakteriálního dvoukomponentního systému. U Arabidopsis thaliana je signál přenášen z histidinkináz (AHK) prostřednictvím přenašečů fosfátu (AHP) do jádra k regulátorům odpovědi (ARR). Protein – proteinové interakce uvnitř této dráhy jsou poměrně dobře popsány, ale není mnoho známo o tom, jak interaguje vícekomponentní systém s jinými signálními drahami A. thaliana právě na úrovni protein – proteinových interakcí. Pomocí tandemové afinitní purifikace byli identifikováni noví potenciální interakční partneři proteinů AHP2 a AHP5. Dva z nich – pTAC17 (plastidový transkripčně aktivní chromosom) a CNP (the crooked neck protein) – byli vybráni pro další analýzy. Pro potvrzení předpokládané interakce proteinu pTAC17 s proteinem AHP5 a určení specificity pTAC17 k proteinům AHP byla vybrána a optimalizována metoda koimunoprecipitace. Pro studium vlivu obou interakčních partnerů na cytokininovou signální dráhu byl použit tzv. test měření délky kořenů.

Abstract:

Cytokinins are plant hormons, which play a very important role in plant development and growth. Cytokinin signalling is mediated via a so-called multistep phosphorelay system (MCS) derived from bacterial two-component signalling. In Arabidopsis thaliana the signal is transferred from sensor histidin kinases (AHKs) to nuclear response regulators (ARRs) via histidin phosphotransfer proteins (AHPs). The protein-protein interactions (PPI) within this pathway are quite well described, but little is known about how the MCS interacts with other pathways in A. thaliana at the level of PPI. For this reason new potential interactors of AHP2 and AHP5 have been identified via tandem affinity purification. Two of them – PTAC17 (plastid transcriptionally active chromosome) and CNP (crooked neck protein) were selected for further analysis. The co-immunoprecipitation (Co-IP) procedure has been optimized to confirm interaction between PTAC17 and AHP5 and to find out the interaction specificity of PTAC17 towards all AHPs. To study impact on cytokinin signalling of both potential partners the so called „root elongation test“ was prepared.

Klíčová slova

cytokininy, cytokininová signální dráha, proteiny AHP, metoda prodlužování kořene, koimunoprecipitace, protein – proteinové interakce, cytokinins, cytokinin signalling pathway, AHP proteins, the root elongation test, co-immunoprecipitation, protein – protein interactions

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 21. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 13. 6. 2012
• Vedoucí: Mgr. Radka Dopitová, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Molekulární biologie a genetika