Vliv stilbenů na zánětlivou odpověď endoteliálních buněk in vitro

Bc. Kateřina Sejpková

Diplomová práce

Stilbenes and their influence on the endothelial inflammatory response in vitro

Anotace:

Lipopolysacharid (LPS) z Escherichia coli indukuje obrannou imunitní reakci prostřednictvím Toll-like receptoru 4 (TLR4), který je členem rodiny vrozených imunitních receptorů rozpoznávajících molekuly asociované s patogeny (pathogene associated molecular patterns, PAMP) a molekuly související s rozvojem stresové reakce (dangerous associated molecular patterns, DAMP). Předpokládali jsme, že stilbeny resveratrol, pterostiben a pinosylvin budou schopné zmírnit aktivaci TLR 4, způsobenou podáním LPS. Jako model jsme použili lidskou endoteliální buněčnou linii odvozenou z pupečníkové cévy (human endothelial cell line, HUVEC). Pro stanovení míry zánětlivé aktivace jsme měřili expresi proteinu mezibuněčné adheze (intercellular adhesion molecule 1, ICAM-1) a produkci interleukinu 6 (IL-6). Pro zjištění změn v aktivaci TLR 4 jsme měřili fosforylaci nukleárního faktoru κB (NFκB) a ERK 1/2. Nicméně resveratrol, pterostilben ani pinosylvin neměli statisticky významný efekt na expresi ICAM-1 ani na produkci IL-6 a ani na aktivaci NFκB či ERK 1/2. Podání stilbenů tedy nezabránilo následné stresové reakci buněk HUVEC na LPS prostřednictvím signalizační dráhy spouštěné aktivací TLR 4.

Abstract:

Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) induces proinflammatory processes via Toll-like receptor 4 (TLR4), a member of innate immunity receptor family recognizing pathogene associated molecular patterns (PAMP) and dangerous associated molecular patterns (DAMP). Stilbenes resveratrol, pterostilbene and pinosylvin were hypothesized to be able to decrease LPS-induced activation of TLR4 signalling pathway. As a model, human endothelial cell line HUVEC derived from umbilical vein was used. Changes in intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) expression and release of interleukin 6 (IL-6) were evaluated as a marker of proinflammatory activation of the cell population, phosphorylation of nuclear factor κB (NFκB) and ERK1/2 was detected to describe proposed effects on activation TLR 4 signalling pathway. Neither resveratrol nor pterostilbene and pinosylvin had significant effect on ICAM-1 expression, IL-6 release and NFκB and/or ERK1/2 activation. We can conclude that pretreatment of HUVEC cells by these stilbenes does not inhibit proinflammatory effects of LPS-induced TLR4 activation.

Klíčová slova

Toll like receptor, vrozená imunita, lipopolysacharid, stilbeny, endotel, innate imunity, stilbens

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 11. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 3. 6. 2015
• Vedoucí: RNDr. Lenka Švihálková Šindlerová, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Experimentální biologie / Speciální biologie