Imunochemická detekce proteinu TNF-α pomocí magnetických částic

Bc. Žaneta Koudelková

Master's thesis

Magnetic particle-based immunochemical detection of TNF-α protein

Anotácia:

Diplomová práce se zabývá optimalizací a vývojem metody pro imunochemickou detekci cytokinu TNF-α založené na principu sendvičové ELISA s využitím magnetických částic. Pro analýzu byly využity magnetické částice funkcionalizované pomocí karboxylových skupin, které umožňují vazbu protilátek. Optimalizací podmínek aktivace částic bylo stanoveno optimální pH MES pufru, koncentrace EDC a způsob aktivace. V druhé části práce byly optimalizovány podmínky průběhu sendvičové ELISA na magnetických částicích. Optimální inkubační doba s antigenem byla stanovena na 3 hodiny a inkubační doba s detekční protilátkou na 1,5 hodiny. Optimalizované podmínky aktivace částic a ELISA byly využity při tvorbě kalibrační křivky standardu TNF-α. Optimalizovaný protokol ELISA na magnetických částicích může být využit ke snadné a efektivní analýze komplexních vzorků jako je krevní sérum, moč nebo sliny.

Abstract:

This thesis is focused on development and optimization of a method for detection of the cytokine TNF-α by the sandwich ELISA using magnetic particles. These particles were functionalized with carboxylic functional groups to enable the antibody binding. Optimal pH of the MES buffer, EDC concentration, and method of activation were determined by optimizing the conditions of particle activation. In the second part of the thesis, the conditions of the magnetic particle-based sandwich ELISA were optimized. It was discovered that mixing the samples during incubation resulted in a higher number of molecules being captured by the antibodies. The optimal incubation times for the antigen and detection antibody were determined to be 3 hours and 1.5 hours, respectively. The optimized conditions for particle activation and ELISA were used to create a calibration curve of TNF-α standards. Optimized magnetic particle-based ELISA protocol can simplify and enhance the analysis of complex samples like blood serum, urine, or saliva.

Kľúčové slová

tumor nekrotizující faktor α, sendvičová ELISA, imunodetekce, magnetické částice

Keywords

immunodetection, sandwich ELISA, tumor necrosis factor α, magnetic particles

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 3. 5. 2023

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 30. 5. 2023
• Vedúci: Ing. Jiří Kudr, Ph.D.
• Oponent: Tomáš Lednický, externi

Mendel University in Brno

Faculty of AgriSciences

Master programme / specializace:
Molecular Biology and Biotechnology / Animal Molecular Biology and Biotechnology