Optimalizace produkce cukr-vázajících proteinů z Aspergillus fumigatus v hostitelském organismu Escherichia coli

Mgr. Jitka Ždánská

Bakalářská práce

Optimization of production of sugar-binding proteins from Aspergillus fumigatus in Escherichia coli host organism

Anotace:

V této bakalářské práci je zkoumána produkce lektinu AFL2 z plísně Aspergillus fumigatus. Jedná se o hypotetický protein, který zatím nebyl izolován v rozpustné formě. Cílem bakalářské práce bylo optimalizovat expresi tohoto proteinu v hostitelském organismu E. coli. Byla optimalizována teplota exprese proteinu, koncentrace induktoru exprese i bod indukce. Bylo testováno několik kmenů E. coli a vliv média na produkci proteinu a jeho rozpustnost. Z optimalizací vyplývá, že pro expresi proteinu AFL2 jsou vyhovující vyšší teploty (25 °C – 37 °C) a to v kmenech E. coli umožňujících tvorbu disulfidických můstků – Origami(DE3) a Shuffle(DE3). Největší vliv na rozpustnost proteinu AFL2 mělo médium. Protein AFL2 v rozpustné formě byl detekován při použití autoindukčního média (Merck).

Abstract:

In this bachelor thesis I deal with production of lectin AFL2 from Aspergillus fumigatus. It is hypothetical protein that was not yet isolated in soluble form. The goal of this bachelor thesis was the optimization of protein expression in Escherichia coli host organism. There were many optimization: the temperature of protein expression, the concentration of protein inducer and the point of induction. It has been tested several strains of E. coli. It has been tested the influence of medium on protein production and its solubility. The result of optimization of protein AFL2 expression is that the suitable cultivation is at higher temperatures (25 °C – 37 °C) in E. coli strains allowing formation of disulfide bonds - Origami(DE3) and Shuffle(DE3). The biggest influence on the solubility of protein AFL2 had medium. Protein AFL2 in soluble form was detected using autoinduction medium (Merck).

Klíčová slova

Aspergillus fumigatus, lektiny, Escherichia coli, aspergilóza, autoindukce, lectins, aspergillosis, autoinduction

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 5. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 17. 6. 2013
• Vedoucí: prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie