Zrání bovinních oocytů in vitro

Kristýna Tuťálková

Bakalářská práce

In vitro maturation of bovine oocytes

Anotace:

Oocyty se vyvíjí v procesu nazývaném oogeneze. Začíná již v prenatálním období embrya, kdy se diferencují na primární a sekundární oocyty pomocí meiotického dělení. V době dospívání dochází k působení hormonů, které umožní zrání oocytůOocyty odebírají z živého či mrtvého zvířete. U živých zvířat se používá metoda OPU, kdy je do krávy zavedeno transvaginální zařízení, které z folikulu na vaječníku odsaje oocyty a množství folikulární tekutiny. Z jatečných zvířat se do laboratoře přivezou pouze vaječníky, ze kterých jsou poté odsáty oocyty a folikulární tekutina.Při laboratorním hodnocení je důležité vybrat oocyty, které splňují určitá kritéria. Kvalitu oocytů lze určit hodnocením charakteristik struktury kumulo – oocytárního komplexu, cytoplazmy oocytů, zóny pellucidy, perivitelinového prostoru, dělícího vřeténka a polárního tělíska.Důležité podmínky pro kultivaci oocytů je teplota, plynné prostředí, médium, osmolarita, čas, pufrační systém a antibiotikum. Tyto podmínky mohou z velké části ovlivnit zrání oocytů. Bovinní oocyty se kultivují 24 h při teplotě 38,5 °C, 5 % CO2 a 95 % vzdušné atmosféře.Médium používané pro zrání oocytů in vitro může ovlivnit procesy, které se podílejí na následném vývoji oocytů. Přičemž nejčastější jsou TCM-199 a Ham's F-10. Do médií se také přidávají séra, která zlepšují zrání oocytů. Mezi nejznámější séra patří fetální bovinní sérum a fetální telecí sérum. Kombinací média a sera se používají – TCM 199 + FBS, DMEM + FCS, Ham´s F-12 + FCS, MEM + FSH. Kromě jejích příznivých podmínek na oocyty mohou způsobit i jejich abnormality.Nejen zrání oocytů lze ovlivnit příznivě, ale existují faktory, které ovlivňují zrání oocytů negativně jako folikulární tekutinou, kompaktnost granulozních buněk, steroidy, androgeny, médii a mnoho dalších.

Abstract:

The oocytes develop in process called oogenesis. It begins already in prenatal period of embryo, when they differentiate in primary and secondary oocytes by meiotic division. The oocytes are in resting phase. At the time of adolescence when hormones work, it occur to mature of oocytes.The oocytes take from living or slaughter animals. In live animals, the Transvaginal ultrasound-guided aspiration method is used, when transvaginal device is introduced into cow which oocytes and follicular fluid remove from the follicule of the ovary. From slaughter animals into to laboratory, whole ovaries bring from which remove oocytes and folicular fluid. In the lab, it is important to select oocytes that fulfill certain criteria. The quality of oocytes can be determined evaluation the characteristics of the structure of a cumulo – oocyte complex, oocyte cytoplasm, zona pellucid, periviteline space, dividing spindle and polar body. Only quality oocytes are cultivated.The important conditions for oocyte cultivation are temperature, number of different gases in the incubator, media osmolarity, incubation time. These condictions can largely affect mature of oocytes. The bovine oocytes are cultured for 24 hours at 38.5 ° C, 5 % CO2 and 95 % air atmosphere. The medium is used for in vitro maturation of oocytes, it can affect the processes, which has part in the subsequent development of oocytes. The media consists of bicarbonate ions, amino acids, antibiotics, energy sources and various substances lika are the serums that allow approximately 80 % of the immature oocytes to pass the metaphase of the second meiotic division. The most common are TCM-199 and Ham's F-10. In addition to its favorable conditions, oocytes can cause their abnormalities.The serums, hormones, antioxidants, hyaluronic acid play an important role in increasing maturation of oocytes.

Klíčová slova

bovinní oocyty, kultivační podmínnky, média, in vitro maturace, odběr oocytů

Keywords

bovine oocytes, culture condictions, media, in vitro maturation, oocyte evaluation

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 20. 4. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Bakalářský studijní program / obor:
Zootechnika / Speciální chovy