Příprava transgenních kataninových linií rostlin Arabidopsis thaliana nesoucích fúzní protein s fluorescenčním markerem u vybraných KATANIN1 mutantů.

Mgr. Markéta TRAJEROVÁ

Bachelor's thesis

The preparation of transgenic katanin lines of Arabidopsis thaliana carrying fusion proteins with fluorescent markers in selected KATANIN1 mutants.

Anotácia:

Katanin je heterodimérní protein sestávající se ze dvou podjednotek se jmény p60 a p80, které odkazují na molekulovou velikost podjednotek u mořské ježovky. Podjednotka p60 má katalytickou funkci, zatímco podjednotka p80 má regulační funkci. Na podjednotce p60 se nachází AAA doména, označující funkci protein jako ATP dependentní. Katanin reguluje mikrotubuly, stejně tak jako MAP kinasy, které jej pravděpodobně také fosforylují. U rostlin byla potvrzena přítomnost pouze homologu k p60 podjednotce. U Arabidopsis thaliana byli připraveni mutanti v genu pro katanin. V rámci této bakalářské práce se pracovalo s mutanty fra2, lue1 a ktn1-2. Do těchto rostlin byly transformovány konstrukty nesoucí nativní nebo mutovaný gen pro katanin s genem pro GFP umístěným před a za tímto genem. Přítomnost fúzního proteinu byla potvrzena metodou Western blot a GFP signál byl pozorován fluorescenčním mikroskopem. Také bylo provedeno zpětné křížení kataninových mutantů s rostlinami divokého typu za účelem přípravy zpětných křížení a fenotypy vzniklých rostlin byly kvantifikovány.

Abstract:

Katanin is heterodymeric protein consisting of two subunits with names p60 and p80, which referes to molecular weight of subuints from sea urchin. Subunit p60 has katalytic function, meanwhile subunit p80 has regulatory function. Subunit p60 contains AAA domain, which marks the function of katanin as ATP dependent. Katanin and MAP kinases regulates microtubules, and katanin is putative substrate for MAP kinases. In plants it has been confirm only homologue to p60 subunit. Mutants in katanin gene has been prepared in Arabidopsis thaliana. In this bachelor thesis were used mutants fra2, lue1 and ktn1-2. Constructs with native and mutated gene for katanin with gene for GFP, placed either before or after katanin gene, were transform into mutated plants. Presence of fusion protein was confirm by Western blot and GFP signal was observed by fluorescence microscope. Moreover, mutant plants were crossed with wild type plant to prepare back crosses and phenotypes of created plants were quantified.

Kľúčové slová

Arabidopsis thaliana, MAP kinasy, GFP, katanin, ktn1-2, fra2, lue1

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 3. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 31. 5. 2017
• Vedúci: Mgr. Ivan Luptovčiak, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Biochemistry / Biotechnology and Gene Engineering