Objasnění role pseudopřijímačové domény genu AHK4 ve vnímání cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana

Bc. Petra Zvolánková

Bakalářská práce

Elucidating the role of receiver-like domain of AHK4 in the cytokinin signaling of Arabidopsis thaliana

Anotace:

Účelem této práce je objasnit roli tzv. pseudopřijímačové (RLD) domény proteinu AHK4 u modelové rostliny Arabidopsis thaliana. AHK4 slouží jako receptor rostlinného hormonu cytokininu v signální dráze vícekrokového přenosu fosfátu. Tato dráha má zásadní postavení v přenosu signálu u rostlin. Projekt zahrnuje klonování konstruktů se změnou RLD domény napodobujících příbuzné proteiny CKI1 a ETR1, které tuto doménu postrádají. Byla použita metoda dvoufragmentového MultiSite Gateway klonování. Primery byly navrženy částečně specificky pro AHK4/pAHK4 a částečně s rekombinačními místy pro GW klonování. Výsledný destinační vektor obsahuje promotorovou oblast a jednotlivé AHK4 konstrukty. Pro kontrolu správnosti inzertu bylo použito restrikční štěpení, PCR kolonií a sekvenace pozitivních kolonií E. coli. Transformace do E. coli stále probíhá. Dalším krokem bude transformace do Agrobacterium tumefaciens a následně do mutantních rostlin za účelem provedení fenotypových analýz vedoucích k objasnění role RLD domény.

Abstract:

The goal of this project is to clarify the role of a Receiver-like domain of the AHK4 protein in the model plant Arabidopsis thaliana. AHK4 acts as a cytokinin receptor in a multistep phosphorelay. It has an important role in cytokinin signaling pathway. This project includes cloning of AHK4 constructs with different RLD domains. It mimics related proteins CKI1 and ETR1 which lack this domain. Two-fragment MultiSite Gateway cloning was used. Primers were designed partially for AHK4/pAHK4 and partially with recombination areas for GW cloning. The final destination vector contains promoter area and individual AHK4 constructs. Restriction digestion, colony PCR and a sequencing of positive colonies of E. coli were used to verify an accuracy of the insert. Transformation to the E. coli is still in progress. Next step will be transformation to Agrobacterium tumefaciens followed by a transformation to mutant plants for a purpose to phenotypic analysis leading to elucidate the role of RLD domain.

Klíčová slova

Cytokininy, AHK4, pseudopřijímačová doména, cytokininová signální dráha

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 12. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 8. 6. 2015
• Vedoucí: doc. RNDr. Jan Hejátko, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Aplikovaná biochemie / Aplikovaná biochemie