Optimalizace kvantifikace a ověření validity v in vitro diagnostických metodách na principu Microblot-Array

Bc. Ondřej Bašanda

Diplomová práce

Optimization of validity quantification and verification in in vitro diagnostic methods based on the Microblot-Array technology principle

Anotace:

Microblot–Array je multiplexová imunochemická metoda pro sérologická stanovení protilátek. Spojuje principy metod ELISA (formát stanovení v mikrotitrační destičce) a imunoblot (stanovení probíhá s proteiny vázanými na nitrocelulózové membráně) a umožňuje testovat paralelně desítky vzorků na desítky možných protilátek. Tato práce popisuje její princip a navrhuje možnosti implementace kontroly přítomnosti vzorku v testu. V práci jsou srovnány možnosti použití různých protilátek a bakteriálních proteinů (Protein A, A/G, L) vázajících lidské protilátky ze vzorku. Vybraný protein A je následně testován v různých pufrech, koncentracích a s různými vzorky. V závěru je sledována dlouhodobá stabilita kontroly na membráně a v roztoku, s cílem vybrat optimální složení roztoku pro použití v Microblot-Array soupravách.

Abstract:

Microblot-Array is a multiplex immunochemical method for serological determination of antibodies. It combines the principles of ELISA (microtitre plate format) and im-munoblotting (assays are performed with proteins bound to the nitrocellulose mem-brane) and allows dozens of samples to be tested in parallel for dozens of possible antibodies. This paper describes its principle and proposes ways to implement the control of sample presence in the assay. The possibilities of using different antibod-ies and bacterial proteins (Protein A, A/G, L) binding human antibodies from the sample are compared. The selected Protein A is then tested in different buffers, con-centrations and with different samples. Finally, the long-term stability of the control on the membrane and in solution is monitored to select the optimal solution formula-tion for use in Microblot-Array kits.

Klíčová slova

Microblot–Array, protein A, imunostanovení, diagnostické metody, ELISA, imunoblot, protein L, protein A/G, protilátky, immunoassay, diagnostic methods, antibodies

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 10. 5. 2024

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 14. 6. 2024
• Vedoucí: prof. RNDr. Petr Skládal, CSc.
• Oponent: doc. Mgr. Zdeněk Farka, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biotechnologie / Biotechnologie