Optimalizace robotických syntéz peptidů na pevném nosiči \nl{} v mikromolárním měřítku

Bc. Ihor Fesina

Master's thesis

Optimization of robotic solid phase peptide synthesis in micromolar scale

Abstract:

Diplomová práce se zabývá optimalizací podmínek robotických syntéz peptidů v mikromolárním měřítku pomocí automatického syntetizátoru MultiPep RSi. K nastavení parametrů robotického syntetizátoru byly využity 4 standardy oligopeptidů. Jako standardy byly syntetizovány a izolovány v čisté formě oligopeptidy: oxytocin, vazopresin, ACP a jeden peptid s ad hoc navrženou sekvencí. Standardy byly purifikovány pomocí preparativní HPLC, jejich čistota a chemická struktura byla analyzována pomocí RP-UPLC, HRMS a HPLC-MS analýzy. Syntézy testovacích peptidů byly provedeny na syntetizátorech Symphony a LibertyBlue. Následně bylo provedeno zkoumání řady parametrů robotického syntetizátoru pro syntézu 4 testovacích peptidů za různých procesních podmínek. Na základě získaných poznatků byl navržen optimalizovaný protokol syntézy. Pomocí optimalizovaného postupu byla provedena úspěšná ověřovací syntéza dvou delších peptidů sestávajících z 15 a 21 aminokyselin.

Abstract:

This master's thesis deals with the optimization of robotic peptide synthesis conditions in micromolar scale using the automatic synthesizer MultiPep RSi. Four oligopeptide standards have been used to set the parameters of the robotic synthesizer. Oligopeptides: oxytocin, vasopresin, ACP, and one peptide with an ad hoc designed sequence have been synthesized and isolated in pure forms. The standards have been purified by preparative HPLC. Purity and chemical structure analysis were provided using RP-UPLC, HRMS and HPLC-MS analysis. Synthesis of the test peptides was performed using Symphony and LibertyBlue synthesizers. A number of robotic synthesizer parameters for the synthesis of the four test peptides under different process conditions have been investigated. Based on the acquired knowledge, an optimized synthesis protocol has been designed. Using an optimized procedure, a successful validation synthesis of two longer peptides consisting of 15 and 21 amino acids has been performed.

Keywords

Peptidy, syntéza na pevné fázi, SPPS, robotická syntéza, optimalizace procesů.

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 9. 5. 2022

Accessible from:: 31. 12. 2999

Thesis defence

• Supervisor: doc. Ing. Jiří Váňa, Ph.D.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Master programme / field:
Chemistry / Organic Chemistry