Použití elektromigračních separačních technik a hmotnostní spektrometrie (MALDI) při studiu vlastností mikroorganismů v různých vývojových stadiích

Bc. Václav Diopan

Diplomová práce

Anotace:

Byl syntetizován neionogenní tenzid polyethyelnhlykol 4-(1-pyren)butanoat, který byl použit pro CIEF sfluorimetrickou detekcí. Toto barvivo bylo užito jako aditivum elektrolytů vkapilární izoelektrické fokusaci pro dynamickou modifikaci vzorku proteinů a mikroorganizmů. Hodnota izoelektrického bodu značených bioanalytů byla, spočítána užitím fluorescenčních pI markerů a porovnána shodnotami natviních látek. Směsi mikroorganizmů a proteinů , Escherichia coli CCM 3954, Staphylococcus epidermidis CCM 4418, Stenotrophomonas maltophilia, Candida albicans CCM 8180, Candida parapsilosis, Candida glabrata, byly reprodukovatelně fokusovány a separovány danými technikami. Pro fluorometrické detekce on columm, bylo minimální detekované množství vna úrovni jednotlivých buněk, injektovaných do separační kapiláry. Tvorba biofirmu je důležitý faktor virulence, indikují vyšší klinický význam S. epidermidis kmenů izolovaných zklinického materiálu. 20 kmenů S. epidermidis bylo zkoumáno pro přítomnost biofilmu CIEF sUV detekcí. Biofilm negativní kmeny byly fokusovány voblasti pI 2.3 a biofilm negativní voblasti pI 2,6. Růstové faktory nemají významný vliv na jejich hodnotu izoelektrického bodu. Proto je izoelektrický bod vhodné kriterium pro určení pI biofilm pozitivního a biofilm negativního kmene S. epidrrmidis

Abstract:

The non-ionogenic pyrene based tenside, poly(ethylene glycol) pyrenebutanoate, was prepared and applied in CIEF with fluorometric detection in gradient of pH range 2-5 end 1-10. This dye was used as a buffer additive in capillary isoelectric focusing for a dynamic modification of the sample of proteins and microorganisms. The values of the isoelectric points of the labeled bioanalytes were calculated with use of the fluorescent pI markers and were found comparable with pI of the native compounds. The mixed cultures of proteins and microorganisms, Escherichia coli CCM 3954, Staphylococcus epidermidis CCM 4418, Stenotrophomonas maltophilia, Candida albicans CCM 8180, Candida parapsilosis, Candida glabrata, Candida were reproducibly focused and separated by the suggested technique. Using UV excitation for the on column fluorometric detection, the minimum detectable amount was down to single cells injected on the separation capillary. The biofilm formation, an important factor of virulence, indicates higher clinical significance of S. epidermidis strains isolated from clinical material. 20 S. epidermidis strains were examined for the presence of biofilm by CIEF with UV detection. The biofilm negative strains focused near pI value 2.3, while the pI values of the biofilm positive strains were near 2.6. The growth factor influences insignificant the values of their isoelectric points. Therefore, the isoelectric point is a useful criterion for the differentiation between biofilm-positive and biofilm-negative S. epidermidis strains.

Klíčová slova

stanovení mikroorganizmů, fluorimetrická detkce, fluorescenční barviva

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 27. 4. 2006

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 24. 5. 2006
• Vedoucí: Ing. Marie Horká, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Chemie / Biochemie